【摘 要】
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目的免疫球蛋白类别转换在生发中心B细胞中进行,从而B细胞由产生IgM转换到产生其他类别的免疫球蛋白如IgG, IgA, IgE. 目前导致类别转换的机制还不清楚. 我们试图克隆参与类
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目的免疫球蛋白类别转换在生发中心B细胞中进行,从而B细胞由产生IgM转换到产生其他类别的免疫球蛋白如IgG, IgA, IgE. 目前导致类别转换的机制还不清楚. 我们试图克隆参与类别转换的基因. 方法原发性免疫缺陷患者B细胞不能进行类别转换,而正常细胞则可以. 据此,我们将患者与正常人的B细胞在同一条件下分别培养以诱导类别转换. 从培养的细胞中分别提取RNA,并反转录成cDNA,由此制备扩增物(amplicon). 最后将来源于患者B细胞的扩增物与正常人B细胞的扩增物混合在一起,在一定条件下进行剔除杂交. 经5轮剔除杂交以后,将剔除共同基因以后的剩余物进行克隆. 经筛选以后将阳性克隆物进行测序及序列分析. 结果在所有克隆中,我们发现一个新基因,命名为整合酶样基因-1. 后证实,该基因来源于实验室细菌株TOP10F. 序列分析表明,ILG1具有原核基因特性,但缺乏真核细胞的基因特性. 在DNA水平,ILG1与任何基因都不具有同源性,但在蛋白水平,它与来源于溶原性p4噬菌体的整合酶具有高达58%的同源性,我们认为ILG1定居于一个新的溶原性p4原噬菌体Φ-TOP10F. ILG1的催化活性区具有高度保守特性,因为活性区的关键氨基酸残基是保守的,这包括高度保守的R-H-R-Y结构. 结论 ILG1很可能是一个新的位点特异性重组酶,是p4噬菌体整合酶家族的新成员.
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