转化生长因子-β1诱导人肺腺癌细胞侵袭迁移的机制

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目的

探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)影响肺腺癌细胞侵袭迁移,以及对上皮-间充质转化(EMT)和自噬的影响。

方法

Transwell检测体外TGF-β1对肺腺癌细胞A549和SK-LU-1迁移与侵袭能力的影响;免疫荧光检测TGF-β1引起的A549细胞自噬水平变化;Western blot实验检测在A549细胞中TGF-β1对EMT标志分子及自噬调控基因表达的影响。

结果

在A549和SK-LU-1细胞中,sh-TGF-β1干扰效率约为60%,GV358-TGF-β1过表达组过表达效率均在4倍以上;迁移实验结果显示,A549细胞中,随机干扰对照组(shNC组)迁移率为1.02 ± 0.06,TGF-β1过表达组为5.14 ± 0.43(t=16.440,P=0.004);SK-LU-1细胞中,shNC组迁移率为1.04 ± 0.08,TGF-β1过表达组为4.92 ± 0.48(t=13.810,P=0.005),差异均有统计学意义;侵袭实验结果显示,A549细胞中,随机干扰对照组(shNC组)侵袭率为0.96±0.07,TGF-β1过表达组为4.28±0.51(t=11.170,P=0.007);SK-LU-1细胞中,shNC组侵袭率为1.03±0.05,TGF-β1过表达组为4.11±0.36(t=10.410,P=0.009),差异均有统计学意义;免疫荧光实验结果可见,与对照组比较,TGF-β1过表达组点状分布的自噬小体数目明显增多(t=22.340,P=0.000),荧光强度显著增强;Western blot实验结果显示,TGF-β1过表达组E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达量明显减少,波形蛋白(Vimentin)、Twist、Snail的表达显著增加;自噬相关蛋白Beclin1表达上调,磷酸化的雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达上调;而TGF-β1干扰组的结果则与过表达组相反。

结论

在肺腺癌细胞中,TGF-β1阳性表达诱导的自噬和EMT可能与其增强肺腺癌细胞侵袭迁移能力相关。

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