【摘 要】
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为获得P-糖蛋白胞外段,构建了高效表达载体pGEX-Pgp,转化大肠杆菌DH5α , 进行表达、鉴定及纯化,以获得的融合蛋白为靶蛋白,筛选噬菌体随机12肽库,免疫细胞化学方法进行鉴定.
【机 构】
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第三军医大学第二附属医院泌尿外科,军事医学科学院肿瘤分子生物室,北京大学泌尿外科研究所
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为获得P-糖蛋白胞外段,构建了高效表达载体pGEX-Pgp,转化大肠杆菌DH5α , 进行表达、鉴定及纯化,以获得的融合蛋白为靶蛋白,筛选噬菌体随机12肽库,免疫细胞化学方法进行鉴定.SDS-PAGE分析,表达出约30 kD大小的蛋白;从噬菌体随机肽库中筛选获得了与P-糖蛋白特异性结合的噬菌体阳性克隆,测序获得了其特异性结合肽序列:NDGLLFTWQPSP.免疫细胞化学结果显示:筛选得到的噬菌体阳性克隆可与耐药细胞BIU-87/ADM结合,而与敏感细胞BIU-87不结合.结果表明,筛选获得的结合肽可与耐药
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