目的 探讨缺氧诱导因子-2仅(HIF-2a)沉默对胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响及其机制。方法常规培养SGC7901细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ—PCR)和Westernblot法检测低氧组(90%氮气+5%氢气+5%二氧化碳)和正常氧条件下HIF-2a、B淋巴细膨白血病-2(bel-2)、bcl-2相关x蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达;合成针对HIF-2a的小干扰RNA(HIF-2a-siRNA);Westernblot检测HIF-2a-siRNA的转染效果;细胞计数试剂盒(CCK)法检测-HIF-2a-siRNA转染后的细胞增殖,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率;FQ—PCR和Westernblot检测转染前后bcl-2、bax、Caspase-3的表达。结果低氧条件下,HIF-2a(2.94±0.31、0.61±0.08)、bcl-2(2.01±0.29、1.05±0.09)mRNA和蛋白表达与正常氧条件下HIF-2仅(1.06±0.15、0.23±0.04)、bcl-2(1.08±0.16、0.34±0.05)比较明显升高,bax(0.54±0.06、0.48±0.05)、Caspase-3(0.45±0.05、0.58±0.07)mRNA和蛋白表达与正常氧条件bax(0.97±0.13、0.74-4-0.12)、Caspase-3(0.96±0.12、0.89±0.14)比较则明显降低(P〈0.05);HIF-2a-siRNA转染后与转染前比较能有效沉默HIF-2d;HIF-2cx—siRNA转染后[(0.47±0.05)%]与转染前[(0.89±0.12)%]比较能抑制增殖水平,与转染前[(8.15±0.97)%]比较,转染后[(20.16±3.09)%]凋亡率升高(P〈0.05);与转染前(0.96±0.09、1.37±0.21、1.13±0.19、0.82±0.16、0.97±0.13、0.69±0.11)比较,转染后可降低bcl-2mRNA和蛋白表达(0.43±0.06、0.78±0.12),升高bax(2.91±0.28、1.51±0.28)、Caspase-3mRNA和蛋白表达(2.42±0.34、1.34±0.21)(P〈0.05)。结论低氧下,HIF-2cx—siRNA可通过降低bcl-2表达、升高bax、Caspase-3表达而诱导SGC7901细胞凋亡。
siRNA沉默缺氧诱导因子-2仪对胃癌细胞SGC7901凋亡的影响和机制
【摘 要】
:
目的 探讨缺氧诱导因子-2仅(HIF-2a)沉默对胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响及其机制。方法常规培养SGC7901细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ—PCR)和Westernblot法检测低氧组(90%氮气+5%氢气+5%二氧化碳)和正常氧条件下HIF-2a、B淋巴细膨白血病-2(bel-2)、bcl-2相关x蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达;合成针
【机 构】
:
唐山市工人医院肿瘤外科,063000,唐山市工人医院肿瘤外科,063000,唐山市工人医院肿瘤外科,063000,唐山市工人医院肿瘤外科,063000,唐山市工人医院肿瘤外科,063000,唐山市工人
【出 处】
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中华实验外科杂志
【发表日期】
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2013年30期
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