【摘 要】
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背景:新近的一些研究认为,采用体外重组瘦素替代疗法对遗传性肥胖、难愈性创面和内源性瘦素缺乏应是行之有效的方法.目的:取人脂肪组织获取瘦素基因,构建pET28a-leptin重组子
【机 构】
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南方医科大学珠江医院整形外科,广东省广州市,510282江西省人民医院整形颌面外科,江西省南昌市,330006;
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背景:新近的一些研究认为,采用体外重组瘦素替代疗法对遗传性肥胖、难愈性创面和内源性瘦素缺乏应是行之有效的方法.目的:取人脂肪组织获取瘦素基因,构建pET28a-leptin重组子.设计、时间及地点:单一样奉观察,实验于2004-06/2007-12在江西省医学科学研究所抗肿瘤室完成.材料:取自22岁汉族女性行重睑于术时皮下脂肪组织,冻存于液氮中备用,供者知情同意.方法:取人脂肪组织,反转录-聚合酶链反应得到瘦素基因后,通过DNA重组技术克隆至pMDl8T载体与pET28a原核表达载体,EcoR Ⅰ+Xho Ⅰ双酶切及测序鉴定.主要观察指标:①cDNA扩增结果.②重组质粒鉴定.③DNA测序结果.结果:扩增得到520 bp目的基因;所构建重组瘦素原核表达载体pET28a-leptin经双酶切电泳见520 bp目的条带,DNA测序与相应基因序列同源性达100%.结论:通过DNA重组至pET28a原核表达载体,经EcoR Ⅰ+Xho Ⅰ双酶切及测序鉴定成功构建pET28a-leptin重组子.
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