【摘 要】
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目的:构建膜联蛋白A5(ANXA5)的重组表达质粒,转染宫颈癌细胞并检测其表达.方法:自行设计引物,引入BamHI和XhoI的酶切位点,PCR法从pJLA503-ANXA5中获得ANXA5基因;将pcDNA3.1质
【机 构】
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承德医学院组胚教研室,承德医学院附属医院,第二军医大学遗传学教研室
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目的:构建膜联蛋白A5(ANXA5)的重组表达质粒,转染宫颈癌细胞并检测其表达.方法:自行设计引物,引入BamHI和XhoI的酶切位点,PCR法从pJLA503-ANXA5中获得ANXA5基因;将pcDNA3.1质粒用BamHI和Xhol双酶切后,用T4连接酶将其与ANXA5基因连接,并经测序证实基因序列正确后,用磷酸钙共沉淀法转染宫颈癌细胞系SiHa细胞,并用Western blot方法检测细胞中ANXA5蛋白的过表达.结果:重组质粒中ANXA5基因序列正确,转染重组质粒后的SiHa细胞过表达ANXA5蛋白.结论:成功构建TpcDNA3.1-ANXA5重组质粒,转染肿瘤细胞后可过表达ANXA5蛋白,为研究ANXA5在肿瘤细胞中的作用奠定了基础.
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