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目的
体外分离培养人羊膜间充质细胞(hAMCs),初步探讨其向子宫内膜上皮细胞分化的可行性。
方法原代分离培养hAMCs和人子宫内膜细胞并鉴定,采用添加50%的子宫内膜细胞培养液,并补充生长因子(TGF-β 10 ng/mL,EGF 10 ng/mL,PDGF-BB 10 ng/mL)和雌激素(17-β雌二醇1×10-7 mol/L)作为诱导剂培养第3代hAMCs,倒置显微镜下观察细胞形态的改变,应用细胞免疫组化检测分化的hAMCs是否表达上皮细胞特异标记角蛋白,并抽提诱导第8天细胞的mRNA,采用荧光定量PCR方法检测分化细胞的CK19基因水平。
结果分离提纯得到的hAMCs可体外长期传代培养,表达间质细胞特异性波形蛋白及胚胎干细胞的表面标记蛋白Oct-3/4,流式检测CD29表达阳性;诱导后的部分细胞形态由成纤维样向上皮样细胞变化,细胞免疫组化染色表达角蛋白,荧光定量PCR检测实验组角蛋白CK19 mRNA表达量明显增加(P<0.05)。
结论建立了人羊膜间充质细胞的分离培养方法,hAMCs在ESCs分泌和外源性因素诱导下可以向子宫内膜上皮细胞方向分化。