探讨骨肉瘤阿霉素耐药细胞外泌体与MDR1、miRNAs的相关性及作用机制。

选取骨肉瘤MG63和U2OS细胞株构建阿霉素耐药株，通过MTT法检测耐药和敏感株的50%抑制浓度（half maximal inhibitory concentration，IC₅₀），于15~120 min中间隔15 min观察一次荧光染色检测荧光强度的变化，RT-PCR和Western Blot检测MDR1的mRNA和P-gp蛋白表达水平等验证骨肉瘤细胞耐药性；通过粒径分析及Western Bolt检测鉴定外泌体。观察PKH26标记的阿霉素耐药细胞外泌体的胞吞作用，并采用MTT法和细胞划痕实验检测阿霉素耐药细胞外泌体与骨肉瘤细胞共培养后细胞的增殖水平、迁移能力及耐药性的变化。通过骨肉瘤源性外泌体测序及生物信息分析、RT-PCR验证miRNAs在骨肉瘤敏感和耐药细胞中的mRNA差异表达水平。观察MG63和U2OS中正常骨肉瘤细胞组与耐药细胞组、耐药细胞 正常外泌体组、耐药细胞 耐药外泌体组成瘤裸鼠肿瘤生长情况，血清外泌体鉴定及其miR-21-5p的mRNA表达水平，RT-PCR、Western Blot和免疫组化检测肿瘤组织中MDR1的mRNA和miR-21-5p蛋白的表达水平。

MG63和U2OS中阿霉素耐药株IC₅₀（11.81、9.33 μg/ml）高于正常株（2.21、0.93 μg/ml），荧光强度减弱速度高于正常株，MDR1的mRNA和P-gp的蛋白表达水平（2.15±0.10、2.127±0.12；0.92±0.11、0.73±0.10）均高于正常株（1.12±0.16，1.02±0.11；0.46±0.03、0.30±0.04），差异均有统计学意义（P