【摘 要】
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目的 以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因为标记基因,探索一种高效获取基因修饰原代工程肝细胞(GMPEH)的新方法.方法 Wistar大鼠70%切肝建立肝再生模型, 术后24 h肝隔离门静脉注射脂质体-质粒DNA复合物(lipofectamine-pEGFP-N1 DNA complexes, lipoplexes)转绿色荧光蛋白(GFP)基因至肝细胞, 对照组注射生理盐水(NS).转染后15 d
【机 构】
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目的 以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因为标记基因,探索一种高效获取基因修饰原代工程肝细胞(GMPEH)的新方法.方法 Wistar大鼠70%切肝建立肝再生模型, 术后24 h肝隔离门静脉注射脂质体-质粒DNA复合物(lipofectamine-pEGFP-N1 DNA complexes, lipoplexes)转绿色荧光蛋白(GFP)基因至肝细胞, 对照组注射生理盐水(NS).转染后15 d (分2组,每组5只:切肝并于门静脉注射lipoplexes组,L;切肝并于门静脉注射NS组,N)均以胶原酶消化、Percoll液梯离心法获取纯化肝细胞悬液;以NS组为对照并以GFP为荧光标记物,用流式细胞仪(FCM)分析实验组肝细胞的转染率.结果 FCM分析L组的平均转染率(%)为(3.40±2.09)%.结论 肝再生模型Lipoplex门静脉途径灌注转染,可获得稳定的EGFP表达率.ITISC法获取GMPEH是一种高效,可行的新方法。
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