【摘 要】
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目的 建立b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗游离多糖含量检测的超速离心联合高效阴离子交换色谱-脉冲安培(high performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detector,HPAEC-PAD)法,并对该方法进行验证及初步应用.方法 将供试品经超速离心后,收集上清获得游离多糖,加入水解液使供试品水解约16h后,采用CarboPacPA-104 mm×250
【机 构】
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中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京102629
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目的 建立b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗游离多糖含量检测的超速离心联合高效阴离子交换色谱-脉冲安培(high performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detector,HPAEC-PAD)法,并对该方法进行验证及初步应用.方法 将供试品经超速离心后,收集上清获得游离多糖,加入水解液使供试品水解约16h后,采用CarboPacPA-104 mm×250 mm分析柱与CarboPacPA-104 mm×50 mm保护柱,氢氧化钠-醋酸钠溶液梯度洗脱,检测供试品游离多糖含量.对该方法进行专属性、线性、精密度、稳定性、准确度验证,确定定量限.用建立的方法检测13个批次Hib结合疫苗游离多糖含量,同时与乙醇沉淀法进行比较.结果 Hib多糖标准品在0.77～12.26 μg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系,测定5次,线性相关系数均大于0.995;方法定量限为1.875 ng/mL;精密度、稳定性的RSD均小于5％;高、中、低3个浓度的平均加标回收率为100.26％,RSD为3.96％.13个批次Hib结合疫苗中的游离多糖含量为6.76％～16.74％.结论 该方法准确可靠,可用于检测Hib结合疫苗游离多糖含量,同时也为其他多糖蛋白结合疫苗游离多糖提取和检测提供了思路.
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