油菜GDSL脂肪酶基因BnLIP1的克隆及其原核表达

来源 :中国农学通报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：holdingmanzsk

【摘要】

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克隆油菜GDSL脂肪酶基因BnLIP1，实现该基因在原核系统中重组表达，为研究其功能奠定基础。采用TRIzol法提取总RNA，通过RT-PCR法扩增BnLIP1编码序列。构建原核表达载体pEL1并转化

【作者】

：

凌华

【机构】

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郑州大学生物工程系

【出处】

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中国农学通报

【发表日期】

：

2007年12期

【关键词】

：

油菜 GDSL-motif 脂肪酶重组表达大肠杆菌 Brassica napus L. GDSL-motif lipases recombinant

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克隆油菜GDSL脂肪酶基因BnLIP1，实现该基因在原核系统中重组表达，为研究其功能奠定基础。采用TRIzol法提取总RNA，通过RT-PCR法扩增BnLIP1编码序列。构建原核表达载体pEL1并转化大肠杆菌，IPTG诱导表达后通过SDS-PAGE检测目的蛋白。根据GenBank报道的序列设计引物。从萌发的油菜种子黄化幼苗中成功克隆到BnLIP1的编码序列，长度为1170bp。将该编码序列构建到原核表达载体pET32a（＋1并与标签序列融合。在E．coliBL21菌株中成功表达了与标签蛋白融合的BnLIP

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