目的:建立能同时检测粪便中溶组织内阿米巴、迪斯帕内阿米巴和莫氏内阿米巴原虫的巢式多重PCR方法;方法:根据溶组织内阿米巴、迪斯帕内阿米巴和莫氏内阿米巴原虫16S rDNA基因序列,设计1对阿米巴属原虫保守引物和3对不同内阿米巴原虫特异性引物,通过反应体系优化及特异性、敏感性等建立了巢式多重PCR方法,并对部分临床样本进行了检测;结果:该巢式多重PCR方法能特异性扩增溶组织内阿米巴、迪斯帕内阿米巴和莫氏内阿米巴原虫目的片段,特异条带大小分别为439、174、553bp,区分明显;该方法可检测粪便样品中阿米巴原虫滋养体的最小值约为20个,在固定其它两种内阿米巴原虫滋养体细胞数量的情况下,该方法最低能分别检测到0.01个E.histolytica、1个E.dispar和0.1个E.moshkovskii滋养体。临床样本的检测也显示巢式多重PCR方法与单一PCR具有较高的一致性。结论:巢式多重PCR方法具有高度的特异性和敏感性,其在溶组织内阿米巴、迪斯帕内阿米巴和莫氏内阿米巴原虫的诊断和流行病学调查中具有重要的应用价值。