【摘 要】
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目的 探究汉黄芩素对人非小细胞肺癌A549细胞侵袭转移的影响及其对上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）的作用和分子机制。方法 MTT试验检测汉黄芩素对A549细胞的毒性作用，HE染色观察汉黄芩素处理前后A549细胞形态学变化，划痕试验、Transwell小室试验检测侵袭转移能力，Western blotting和qRT-PCR测定EMT相关标志
【机 构】
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福建医科大学省立临床医学院福建省立医院药学部
【基金项目】
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福建省自然科学基金项目（2018J01254,2020J011094）； 福建省立医院“创双高”火石（科研培育）基金项目（2019-07）；
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目的 探究汉黄芩素对人非小细胞肺癌A549细胞侵袭转移的影响及其对上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）的作用和分子机制。方法 MTT试验检测汉黄芩素对A549细胞的毒性作用，HE染色观察汉黄芩素处理前后A549细胞形态学变化，划痕试验、Transwell小室试验检测侵袭转移能力，Western blotting和qRT-PCR测定EMT相关标志物表达情况。利用高通量测序技术，检测汉黄芩素处理TGF-β1诱导的A549前后差异表达的miRNA，进行qRT-PCR验证；划痕试验、Transwell小室试验分析细胞转染miRNA mimic、inhibitor和NC后A549细胞侵袭转移能力，Western blotting和qRT-PCR测定EMT相关标志物的表达情况。运用GO和KEGG数据库分析，找出目标miRNA作用的靶基因；Western blotting和qRT-PCR验证miRNA mimic、inhibitor和NC转染后靶基因及蛋白的表达情况；双荧光素报告酶基因试验证明该miRNA对靶基因翻译的调控作用。结果 汉黄芩素可抑制A549细胞的生长增殖，上调TGF-β1诱导的A549细胞E-cadherin及下调Vimentin的表达，降低细胞迁移的能力，逆转细胞的形态变化。高通量测序得到差异表达的miRNA，其中汉黄芩素可逆转miRNA-135b-3p在A549细胞EMT过程中的过表达，抑制A549细胞的侵袭和转移。信号通路分析及miRNA数据库靶基因预测miRNA-135b-3p可调控SIX4的表达。双荧光素报告基因试验显示miRNA-135b-3p可结合于SIX4基因的3’-UTR产生调控，Western blotting、qRT-PCR证明过表达miRNA-135b-3p的A549细胞SIX4表达降低，敲低miRNA-135b-3p后可恢复。结论 汉黄芩素调控miRNA-135b-3p靶向SIX4抑制A549细胞的侵袭转移和EMT过程。
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