【摘 要】
：
目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157:H7志贺样毒素A亚单位(Shiga-like toxin,Stx2A),并对其初步纯化.方法设计引物采用PCR法自EHEC
【机 构】
：
第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室
论文部分内容阅读
目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157:H7志贺样毒素A亚单位(Shiga-like toxin,Stx2A),并对其初步纯化.方法设计引物采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增Stx2A的编码基因stx2a,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11c(+)-stx2a,经测序鉴定后转化E.coli.BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDSPAGE和Westen blot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白.结果扩增的stx2a基因约950bp;原核表达质粒pET-11c(+)-stx2a经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli.BL21(DE3)中得到高效表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量约31×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达92.3%.结论EHEC O157:H7 Stx2A的高效表达与初步纯化,为探讨O157:H7菌的感染机制奠定基础.
其他文献
本文对湖北卫星地球站使用的CPI GEN IV速调管高功放在运行中出现的故障与现象进行了分析,并给出了解决的办法.
网络系统的广泛应用为企业带来便利的同时,也带来一系列的安全问题。本文主要根据当前存在的企业级网络安全隐患,提出了一些网络安全解决方案。
Wide application of networ
针对炮泥的使用和损毁机理,选择具有相应性能的炮泥,通过延长出铁口的深度,抑制炉内的渣铁环流,从而保护炉缸,实现高炉长寿,减少炮泥消耗,降低生产成本.
目的总结肝胰肾联合移植围手术期处理的经验.方法报告肝、胰、肾一期联合移植治疗1例乙型肝炎后肝硬化、肝功能不全合并慢性肾功能不全伴慢性胰腺炎导致胰岛素依赖型糖尿病患
目的探讨胚胎发育不良性神经上皮肿瘤(DNT)的临床及病理特点。方法对近年来收治的5例DNT的临床症状和体征、影像学、电生理及病理学资料进行了回顾性分析。结果 DN T典型的临
目的探讨胸廓上口大血管损伤病因分类和救治经验。方法分析经手术治疗的64例胸廓上口大血管损伤的临床资料,其中男44例,女20例;年龄18~68岁。致伤原因分别为创伤性(锐器伤、
随着现代教育技术发展,电子词典的使用越来越普遍。然而,学生对电子词典的过分依赖和不恰当的使用,对大学英语的教与学都产生了负面的影响。因此,教师应当给予其正确的引导,
目的检测烫伤大鼠创面脓毒症发生后肝脏组织中脂代谢相关基因表达水平的变化,并分析其意义。方法将60只背部30％TBSAⅢ度烫伤大鼠随机分为创面脓毒症组和对照组,每组30只。创面
根据中国科技论文与引文数据库所提供的数据,对2001～2004年的总被引频次、影响因子、引文指标及基金资助论文比例等计量指标进行分析.结果看到,在中国科技论文与引文数据库期
目的探讨PKC在脊髓空洞前状态中活性变化及其对AQP4调控作用。方法用新西兰兔56只制作模型,术后1、3、7、14、21d用免疫组织化学技术检测AQP4表达变化、应用底物磷酸化法测定