【摘 要】
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目的 研究低氧环境对人脐带间充质干细胞（h UCMSCs）增殖及生物学特性的影响。方法 分别在5%O2和21%O2环境下培养h UCMSCs，使用群体倍增时间（PDT）评价h UCMSCs的增殖情况；流式细胞术检测细胞表面标志CD73、CD90、CD105、CD34、CD45、HLA-DR的表达；培养基诱导分化后，茜素红-S对含钙骨细胞染色检测成骨诱导分化，油红O对脂滴染色检测成脂诱导分化，阿尔新
【基金项目】
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天津市科技计划创新平台专项（18PTSYJC00070）； 天津市博士后择优资助计划项目（TJQYBSH2018030）；
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目的 研究低氧环境对人脐带间充质干细胞（h UCMSCs）增殖及生物学特性的影响。方法 分别在5%O2和21%O2环境下培养h UCMSCs，使用群体倍增时间（PDT）评价h UCMSCs的增殖情况；流式细胞术检测细胞表面标志CD73、CD90、CD105、CD34、CD45、HLA-DR的表达；培养基诱导分化后，茜素红-S对含钙骨细胞染色检测成骨诱导分化，油红O对脂滴染色检测成脂诱导分化，阿尔新蓝8GX对蛋白多糖检测软骨诱导分化；羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）染色法检测h UCMSCs对植物血凝素P（PHA-P）刺激的外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）的增殖抑制作用，并应用流式细胞术检测对CD8+T细胞的抑制作用；实时荧光定量PCR（q RT-PCR）法检测低氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、肝细胞生长因子（HGF）、胰岛素样生长因子2（IGF-2）、转化生长因子β（TGF-β）、碱性成纤维细胞生长因子（b FGF）、基质细胞衍生生长因子1（SDF-1）、神经生长因子（NGF）m RNA表达；试剂盒法检测细胞培养上清中IGF-2浓度。结果 21%O2和5%O2环境培养的h UCMSCs表面标志CD73、CD90、CD105的表达均为阳性（＞95%）,CD34、CD45、HLA-DR的表达均为阴性（＜2%），均具有成骨、成脂、成软骨三系分化的能力；5%O2组的PDT均显著小于21%O2组（P＜0.05）;PBMC经PHA-P刺激后观察到细胞增殖聚集，与h UCMSCs共培养后几乎没有聚集出现，与PBMC+PHA-P组比较，PBMC+PHA-P+h UCMSCs（21%或5%O2）组子代细胞明显减少，PBMC+PHA-P+h UCMSCs（5%O2）组PBMC抑制率为（61.44±0.92）%，与PBMC+PHA-P+h UCMSCs（21%O2）抑制率（60.48±4.00）%相当，无统计学差异，且两组h UCMSCs对CD8+T细胞的抑制作用无统计学差异。与21%O2组比较，5%O2组h UCMSCs HIF-1α、IGF-2、SDF-1、HGF、VEGF、b FGF、NGF m RNA表达水平显著升高（P＜0.05、0.001）,TGF-β无明显变化；5%O2组h UCMSCs培养上清IGF-2水平显著高于21%O2组（P＜0.001）。结论 5%O2环境可使h UCMSCs的增殖能力和相关生长因子的表达增强，尤其是IGF-2，但依然保持着与21%O2环境培养的h UCMSCs相似的表型、分化能力以及淋巴细胞增殖抑制能力。
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