目的 建立针对A/B型肉毒梭菌毒素基因的实时荧光定量PCR检测方法,构建标准曲线,评价该方法的特异性、敏感性及检测下限,以提高肉毒梭菌检测的快速性、准确性。方法 根据肉毒梭菌A型及B型毒素基因设计特异性引物及探针,优化反应条件,建立实时荧光定量PCR反应体系。用25种细菌评价该方法的特异性,使用含有A型及B型毒素基因特异性序列的重组质粒标准品构建标准曲线,模拟粪便标本,评价建立方法的灵敏度。结果 建立的Real-time PCR检测方法特异性好,携带A型及B型毒素基因的重组质粒均出现相应特异性扩增曲线,对其他25种细菌进行试验扩增时,均未见出现特异性扩增曲线。根据重组质粒标准品构建的标准曲线可确定其对肉毒梭菌A型及B型毒素基因检测灵敏度分别为5.04×10~2拷贝/μl和6.91×10~2拷贝/μl。模拟粪便标本中含有目的基因重组质粒的检测下限为A型1.71×10~3拷贝/μl,B型2.14×10~3拷贝/μl。结论 本研究成功建立了利用Real-time PCR技术检测毒素基因快速鉴定A/B型肉毒梭菌的方法。