真核表达载体pEGFP—N1-VP3的构建及在SGC-7901细胞中的表达和定位

来源 :生物学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：BigWrist

【摘要】

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构建真核表达载体pEGFP—N1-VP3并稳定转染人胃癌细胞SGC-7901，观察EGFP—VP3融合蛋白在肿瘤细胞中的分布和亚细胞定位，探讨凋亡素诱导肿瘤细胞凋亡的机制。用PCR技术扩增出（凋

【作者】

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刘少宁祖毅向廷秀王丕龙王丽娟曹红丹吕琳

【机构】

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重庆医科大学附属第一医院消化内科,重庆市第八人民医院,重庆医科大学附属第一医院实验研究中心

【出处】

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生物学杂志

【发表日期】

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2009年1期

【关键词】

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凋亡素融合蛋白真核表达胃癌细胞 Apoptin fusion protein eukaryotic expression gastric can

【基金项目】

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国家自然科学基金青年基金（30500234）,重庆市卫生局自然科学基金（05-2-175）

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构建真核表达载体pEGFP—N1-VP3并稳定转染人胃癌细胞SGC-7901，观察EGFP—VP3融合蛋白在肿瘤细胞中的分布和亚细胞定位，探讨凋亡素诱导肿瘤细胞凋亡的机制。用PCR技术扩增出（凋亡素）VP3基因片段，克隆至载体pEGFP-N1。鉴定无误后，将构建的重组质粒pEGFP-N1-VP3经脂质体介导转染SGC-7901细胞，在荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察凋亡素在肿瘤细胞中的分布、亚细胞定位。用AO／EB荧光染色法检测其在体外诱导肿瘤细胞凋亡的效应。经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测

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