【摘 要】
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目的 探讨非复制型腺病毒介导抗-HBc单链抗体(ScFv)细胞内表达效率,并确定是否具有特异性抗原结合活性.方法 将经细菌内同源重组并在293细胞中包装产生的携带抗-HBc ScFv基因
【机 构】
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上海交通大学附属第六人民医院感染病科,广州中山大学附属第三医院传染病科
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目的 探讨非复制型腺病毒介导抗-HBc单链抗体(ScFv)细胞内表达效率,并确定是否具有特异性抗原结合活性.方法 将经细菌内同源重组并在293细胞中包装产生的携带抗-HBc ScFv基因的非复制型重组腺病毒,按感染复数为10体外转染HepG2细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达;取培养上清液和细胞裂解上清液进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot法检测HBc ScFv表达.结果 重组腺病毒Ad-ScFv感染HepG2细胞后,荧光显微镜下观察到HepG2细胞中绿色荧光蛋白;十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳显示培养上清液和细胞裂解物中可见2.7×104左右的蛋白条带;Western blot显示有乙型肝炎核心抗原特异性结合活性阳性反应条带出现.结论 携带抗-HBc ScFv基因的非复制型重组腺病毒能在真核细胞中有效表达抗-HBc ScFv,并具有特异性抗原结合活性.
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