【摘 要】
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目的 探讨Gemin3基因表达在细胞凋亡中的作用及途径.方法 采用免疫共沉淀、谷胱甘肽-S转移酶共沉淀实验确定Gemin3与p53两种蛋白在体内、体外相互结合及相瓦作用的结构域.荧
【机 构】
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中国医科大学附属第一医院妇科,辽宁省北镇市人民医院妇产科
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目的 探讨Gemin3基因表达在细胞凋亡中的作用及途径.方法 采用免疫共沉淀、谷胱甘肽-S转移酶共沉淀实验确定Gemin3与p53两种蛋白在体内、体外相互结合及相瓦作用的结构域.荧光素酶报告基因检测转染Gemin3基因对p53基因的影响,依靠慢病毒载体介导小干扰RNA敲低Gemin3基因的表达,并经嘌呤霉素筛选获得稳定的Gemin3低表达细胞系,实时定量PCR检测Gemin3敲低对p53及其下游基因在转录水平的影响,流式细胞术检测Gemin3敲低对细胞凋亡的影响.结果 Gemin3的C端与p53的中部DNA部位相互结合.将p53报告基因、p53蛋白基因以及逐渐增量的Gemin3基因共转染Saos-2细胞,随着Gemin3质粒转染浓度的增高,p53介导的报告基因表达水平逐渐降低,Gemin3在转录水平抑制p53基因的表达.实时定量PCR结果显示,与对照细胞比较,Gemin3敲低细胞中,p53、p21和Bax mRNA的表达水平明显增高.Western blot检测结果显示,Gemin3敲低细胞中,p53的表达明显升高.流式细胞术检测结果显示,敲低Gemin3基因的表达导致细胞凋亡的增加.结论 Gemin3与p53相互结合并通过抑制p53的表达阻碍细胞凋亡.
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