S-同型半胱氨酸甲基转移酶活性检测和保存方法的建立

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目的:建立一种简单的S-同型半胱氨酸甲基转移酶(H MT)活性测定方法,确定 H MT的最佳使用条件,并初步探索HMT的保存方法。方法采用原核表达系统制备 HMT,经镍亲和层析和Sephadex G15两步纯化。SDS-PAGE 对目的蛋白进行理化性质鉴定。基于5,5′-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)可以特异性地与含有巯基的化合物快速发生化学反应的原理,通过检测同型半胱氨酸的减少量来计算酶活性,确定 HMT最佳活性测定条件。比较添加和不添加甘油的两组 HMT 酶液置于不同温度下保存,定期测定活力
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