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目的
为解决鼠源性单克隆抗体用於临床会引起变态反应等负作用问题,试图从基因水平上对登革3型病毒鼠源性单抗进行人源化改造以减少其鼠源性。
方法选用对登革病毒4个血清型及部分黄病毒具有中和活性的抗登革3型病毒单克隆抗体3D3的轻重链可变区基因,通过反转录和聚合酶链反应(PCR)扩,扩增后的轻重链可变区PCR产物通过连接引物连接成单链抗体基因,然后与噬菌体载体pCANTAB5E连接,转化大肠杆菌HB2151,使单链抗体以可溶性的形式表达在上清液中。
结果通过免疫荧光和SDS-PAGE分析表明,可溶性表达的单链抗体能与登革3型病毒抗原发生特异性结合,在SDS-PAGE中在28 kD处有一条带和单链抗体的分子量大小一致。
结论表达产物与原单抗3D3一样,具有与登革3型病毒抗原结合的特性。