【摘 要】
：
目的 探讨ABx亚型相关的B型糖基转移酶(GTB)突变p.R180C的酶动力学特征.方法 以本课题组已构建的野生型GTB-pcDNA3.1真核表达载体为基础,采用定点突变试剂盒构建携带GTB突变p
【机 构】
：
上海交通大学医学院附属瑞金医院临床输血科,上海200025
论文部分内容阅读
目的 探讨ABx亚型相关的B型糖基转移酶(GTB)突变p.R180C的酶动力学特征.方法 以本课题组已构建的野生型GTB-pcDNA3.1真核表达载体为基础,采用定点突变试剂盒构建携带GTB突变p.R180C的表达载体突变体,并以DNA直接测序法验证突变质粒的序列;以野生型和突变型表达载体转化人胚肾上皮细胞(293F)做蛋白表达;再将经亲和柱Ni-IDA纯化后的表达蛋白以SDS-聚丙酰胺凝胶电泳法鉴定;最后采用酶动力学活性检测试剂盒检测酶动力学参数米氏常数(Km)和催化常数(Kcat).结果 DNA直接测序:成功构建野生型和突变型GTB-pcDNA3.1真核表达载体;SDS-聚丙酰胺凝胶电泳:野生型和突变型GTB蛋白在293F内成功表达并获得纯化;酶动力学检测:p.R180C突变型GTB的Kcat及Km值分别为野生型GTB的1.7％、3.4倍[岩藻糖(H)受体]与25％、5.2倍[二磷酸尿苷半乳糖(UDP-Gal)供体].结论 GTB突变p.R180C降低了该酶对H受体和UDP-Gal供体的亲和力和其催化速率,尤其是对H受体的催化速率,进而导致了红细胞表面H抗原生成B抗原的含量减少.
其他文献
目的 探索荧光定量PCR技术在献血者疟原虫检测中的应用.方法 参照文献设计针对疟原虫18S小亚基核糖体RNA(18SrRNA)基因序列的通用引物和探针并构建标准质粒;将标准质粒和4种
Early blood-brain barrier(BBB)disturbance contributes to many different neurological diseases including Alzheimer's disease,Parkinson's disease and stroke,parti
Parkinson's disease(PD)motor symptoms are induced by the loss of dopaminergic neurons containing neuromelanin in the nigrostriatal system.The exact mechanism th
目的 探讨腹腔镜子宫全切术麻醉诱导前静脉注射利多卡因对镇痛效果及患者术后康复的影响.方法 选取2017年6月-2019年6月期间来该院接受腹腔镜子宫全切术的患者114例,美国麻醉
目的 研究通过一步离子交换层析法,制备vWF∶Rco/FⅧ:∶C≈1的人血管性血友病因子/人凝血因子Ⅷ蛋白液.方法 选用Toyopearl?DEAE-650填料,取同一批次的人血管性血友病因子(vW