观察槲皮素通过影响B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)表达及其对诱导人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RAFLSs)凋亡作用的影响。
方法收集类风湿性关节炎(RA)患者的滑膜组织标本,RA的诊断标准符合美国风湿病学协会修订的诊断标准。采用胰蛋白酶消化法分离滑膜细胞,用光学显微镜观察细胞的形态,流式细胞术分析体外培养的RAFLSs表面标记的白细胞分化抗原3(CD3)、CD19、CD14、以及CD90的表达。选用不同浓度的槲皮素(0、100、200、300 μmol/L)处理RAFLSs 48 h。利用Western blot法检测槲皮素处理后RAFLSs中促凋亡蛋白bax和抗凋亡蛋白bcl-2的灰度值,DNA片段化试验检测槲皮素对RAFLSs凋亡率,分析bcl-2/bax值对槲皮素处理后成纤维样滑膜细胞(FLSs)凋亡率的影响。
结果以槲皮素浓度为0 μmol/L时bcl-2/bax值(8.26±0.08)作为溶剂对照组,槲皮素浓度为100、200、300 μmol/L时处理48 h bcl-2/bax值(3.23±0.11、0.26±0.05、0.12±0.03),与对照组比较bcl-2/bax显著减小,差异有统计学意义(P<0.01)。与槲皮素浓度为0 μmol/L对照组的RAFLSs的凋亡率[(6.5±0.9)%]比较,100 μmol/L槲皮素处理48 h RAFLSs的凋亡率[(19.9±3.8)%]增加(P<0.05),而200、300 μmol/L槲皮素处理48 h RALFSs的凋亡率[(34.3±6.7)%和(42.5±4.8)%]则显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。
结论槲皮素能够通过调控bax、bcl-2的表达来影响RAFLSs的凋亡,且RAFLSs凋亡率与bcl-2/bax值成反比。