Bmi1对小鼠颅缝间充质细胞增殖能力的影响

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目的

探讨Bmi1对小鼠颅缝间充质干细胞增殖能力的影响。

方法

首先分离并培养出生后2~5 d的同窝C57BL/6 J乳鼠(6只)原代后额缝及矢状缝衍生细胞,通过流式细胞术及多系分化能力鉴定2种颅缝来源细胞的间充质干细胞特性,进一步通过实时定量聚合酶链反应检测2种颅缝间充质干细胞中干细胞特性相关基因Bmi1、Twist1、Axin2及Gli1 mRNA表达水平,并在矢状缝间充质细胞中转染Bmi1小干扰RNA下调Bmi1的表达,分析其对颅缝间充质干细胞增殖能力的影响及下游蛋白的变化。2组间均数比较采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。

结果

在体外成功培养出小鼠颅缝衍生细胞,通过流式细胞术发现,该细胞系大量表达间充质干细胞标志CD44、CD90、CD73,不表达CD34,并具有成骨、成软骨及成脂分化能力。实时定量聚合酶链式反应结果表明,与矢状缝间充质干细胞相比,Bmi1(0.006 30±0.000 58比0.002 60±0.000 34、t=5.430、P=0.005 6)、Twist1(0.000 31±0.000 04比0.000 15±0.000 02、t=3.343、P=0.028 8)、Axin2(0.000 33±0.000 03比0.000 17±0.000 05、t=3.067、P=0.037 4)及Gli1 mRNA (0.001 10±0.000 13比0.000 60±0.000 33、t=3.956、P=0.016 7),在后额缝间充质干细胞中表达呈不同程度地下降,其中Bmi1下降程度最高。在矢状缝间充质干细胞中下调Bmi1的表达后,与对照组相比较,Ink4a蛋白水平显著上调,然而其细胞增殖能力明显下降。

结论

通过抑制Bmi1的表达上调Ink4a蛋白表达水平,可降低小鼠颅缝间充质细胞的增殖能力,可能使其在生长发育过程中逐渐减少,从而导致颅缝提前闭合。

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