【摘 要】
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目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)调控低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)表型转化的分子机制.方法 采用组织贴块法培养大鼠PASMC.将PASMC分为常氧组、低氧组(1%O2、94% N2、5
【机 构】
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江苏大学附属医院心内科,镇江,212001
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目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)调控低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)表型转化的分子机制.方法 采用组织贴块法培养大鼠PASMC.将PASMC分为常氧组、低氧组(1%O2、94% N2、5%CO2,低氧刺激12 h)、低氧(1%O2、94% N2、5% CO2)+DHA(10 μmol/L)组(给予DHA处理后低氧孵育12 h),低氧(1%O2、94% N2、5% CO2)+DHA(10 μmol/L)+过表达NFATc1组(细胞转染过表达NFATc1载体24h,然后再给予DHA及低氧刺激12 h)及低氧(1% O2、94% N2、5%CO2)+DHA(10 μmol/L)+敲低NFATc1组(细胞转染NFATc1小干扰RNA 24 h,然后再给予DHA及低氧刺激12 h).使用三气培养箱制造低氧环境加以干预.分别采用实时定量PCR和Western blot法检测各组细胞的NFATc1 mRNA和蛋白表达水平,分别采用免疫荧光染色、Western blot和实时定量PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平,采用实时定量PCR法检测平滑肌肌动蛋白相关蛋白22(SM22) mRNA表达水平,采用5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EDU)法检测PASMC增殖情况.结果 低氧刺激12 h,低氧组大鼠PASMC NFATc1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于常氧组(P均<0.05),而低氧+DHA组则均明显低于低氧组(P<0.05).转染NFATc1过表达病毒及小干扰RNA24h后,低氧刺激大鼠PASMC 12 h,低氧组大鼠PASMC α-SMA阳性的细胞数、α-SMA蛋白及mRNA以及SM22 mRNA表达水平均明显低于常氧组(P均<0.05),低氧+DHA组则高于低氧组(P<0.05),低氧+DHA+过表达NFATc1组则明显低于低氧+DHA组(P<0.05),而低氧+DHA+敲低NFATc1组又明显高于低氧+DHA+过表达NFATc1组(P<0.05).低氧组大鼠PASMC增殖率明显高于常氧组(P<0.05),低氧+DHA组则明显低于低氧组(P<0.05),低氧+DHA+过表达NFATc1组则明显高于低氧+DHA组(P<0.05),而低氧+DHA+敲低NFATc1组又明显低于低氧+DHA+过表达N FATc1组(P<0.05).结论 DHA可通过抑制NFATc1调控低氧诱导的大鼠PASMC由收缩型向合成型转化及增殖.
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