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该实验以海洋来源的微小杆菌（Exiguobacterium sp.）S-09为出发菌株,对其发酵培养基和产酶条件进行优化。并将粗酶液经硫酸铵盐析、透析、超滤离心和Sephadex G-100凝胶过滤层析进行分离纯化。结果表明,其最佳发酵培养基为0.5%的肌酐作为碳源、0.3%胰蛋白胨和0.2%玉米浆作为复合氮源,诱导物肌酸含量为0.3%;其最佳发酵条件为作用pH值7.5、温度25℃、装液量50 mL/250 mL、接种量3%。Fe2+和Mn2+能显著促进产酶。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）凝胶电泳结果显示,纯化后的肌酐水解酶分子质量为24.3 ku。