观察磷酸肌醇3激酶(PI3K)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂NVP-BEZ235对奥沙利铂诱导的人结肠癌HCT116细胞凋亡的影响。
方法不同浓度的奥沙利铂和(或)PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235处理体外培养的结肠癌HCT116细胞，采用噻唑蓝(MTT)法检测奥沙利铂和(或)PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235对HCT116细胞生存率的影响。流式细胞术(FCM)检测奥沙利铂和(或)PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235对HCT116细胞凋亡率的影响。免疫荧光检测奥沙利铂和(或)PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235对HCT116细胞核形态的影响。Western blot检测奥沙利铂和(或)PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235对DNA损伤标志基因磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)及凋亡相关蛋白表达水平的影响。
结果MTT结果显示，2、4、8、16、32、64 μg/ml奥沙利铂以剂量依赖的方式抑制了HCT116细胞增殖，且约16 μg/ml奥沙利铂能够抑制50%的HCT116细胞增殖；流式细胞术的结果显示，4、16、64 μg/ml奥沙利铂作用HCT116细胞24 h后，凋亡率分别是11%、36%和80%(P＝0.026)；免疫荧光结果显示，奥沙利铂和NVP-BEZ235联合应用明显地增加了HCT116细胞凋亡率，观察到HCT116细胞核明显地发生皱缩；Western blot结果显示，凋亡相关蛋白裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)的表达水平明显升高(P＝0.026)，同时也检测到DNA损伤标志基因γ-H2AX表达明显上调(P＝0.017)。
结论PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235明显地增强了奥沙利铂诱导的结肠癌细胞凋亡作用，并增强了奥沙利铂导致的结肠癌细胞DNA损伤效果。