E2F-1真核表达载体的构建和Genectin抗性细胞的筛选

来源 :山东医药 | 被引量 : 0次 | 上传用户：wooicheang

【摘要】

：

目的通过构建含E2F-1基因的真核表达载体,转染胃癌细胞MGC-803,获得Genectin抗性的稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株。方法 PCR扩增E2F-1基因片段,经限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ

【作者】

：

王长青尹永硕李雷谢玉波肖强

【机构】

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深圳市宝安人民医院,东莞市人民医院,广西医科大学附属第一医院

【出处】

：

山东医药

【发表日期】

：

2010年48期

【关键词】

：

E2F-1 胃肿瘤 MGC-803细胞转染 E2F-1 stomach neoplasms MGC-803 cell Transfection

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目的通过构建含E2F-1基因的真核表达载体,转染胃癌细胞MGC-803,获得Genectin抗性的稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株。方法 PCR扩增E2F-1基因片段,经限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选。用脂质体Lipofectamine 2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株。RT-PCR和Western blot技术检测MGC-803/E2F-

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