【摘 要】
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为了进一步研究notch3基因在斑马鱼中的功能,构建了斑马鱼notch3真核表达载体并在真核细胞中成功表达.其中斑马鱼notch3基因编码序列(coding sequence,CDS)从NCBI的在线数据库中获得,根据序列克隆其胞内段(notch intracellular domain,NICD),接着利用同源重组技术构建pCMV-N3ICD表达载体.再通过双酶切和测序筛选阳性重组载体,借由脂质体法转染至HEK293T细胞中,最后经细胞免疫荧光技术和蛋白质印迹法验证N3ICD的表达.结果显示,重组质粒经
【机 构】
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上海海洋大学 水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室,上海 201306;上海海洋大学 国家水生动物病原库,上海 201306;密歇根州立大学渔业与野生生物系,东兰辛 48824,美国
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为了进一步研究notch3基因在斑马鱼中的功能,构建了斑马鱼notch3真核表达载体并在真核细胞中成功表达.其中斑马鱼notch3基因编码序列(coding sequence,CDS)从NCBI的在线数据库中获得,根据序列克隆其胞内段(notch intracellular domain,NICD),接着利用同源重组技术构建pCMV-N3ICD表达载体.再通过双酶切和测序筛选阳性重组载体,借由脂质体法转染至HEK293T细胞中,最后经细胞免疫荧光技术和蛋白质印迹法验证N3ICD的表达.结果显示,重组质粒经酶切电泳片段及测序比对均与预期结果一致.在蛋白质印迹实验中N3ICD蛋白可正常表达,且大小与预测结果一致.细胞免疫荧光显示重组质粒可以在HEK293T细胞的细胞核中表达.同时,构建的N3ICD真核表达载体能够明显增强NF-κB(nuclear factor-кB)家族中rela和nfκb1启动子的活性.成功构建了pCMV-N3ICD真核表达载体.
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明确不同磷水平条件下接种丛枝菌根真菌(AMF)对桔梗质量与产量的影响.采用盆栽法,设计P0(20 mg/kg)、P1(50 mg/kg)、P2(80 mg/kg)、P3(140 mg/kg)共4个磷水平,同一磷水平分别接种摩西斗管囊霉(Funneliformis mosseae,FM)、根内根孢囊霉(Rhizophagus intraradices,RI)、象牙白多样孢囊霉(Diversispora eburnea,DE)和不接种处理.测定不同处理丛枝菌根真菌侵染率、桔梗的生物量、桔梗抗逆性指标、桔梗皂苷
透明质酸酶能够将透明质酸聚糖降解成具有抗氧化等生物活性的低分子量寡糖.微生物来源透明质酸酶具有酶学性质多样和易于重组表达等特点,是开发透明质酸酶的研究热点.通过基因组测序获得一个潜在的金黄色葡萄球菌来源透明质酸裂解酶基因hylS,将其进行了大肠杆菌BL21(DE3)异源重组表达,并对重组酶进行了酶学特性和酶解产物抗氧化性分析.纯化后的重组酶rHylS的最适pH和温度分别为5.0和45℃;专一性降解透明质酸,比活是(1.6×105±5.4)U/mg;降解透明质酸产生低分子量的不饱和寡糖,属于内切透明质酸裂解
为探讨微生物菌肥在设施栽培黄瓜上的应用效果,以水果黄瓜为实验材料,设定施用“宁盾”A液(T1)、施用“宁盾”B液(T2)、同时施用“宁盾”A液与“宁盾”B液(T3)、对照(CK)4个处理,结果表明“宁盾”能够促进黄瓜植株生长、提高叶绿素含量和产量、改善果实营养品质;同时提高根际土壤蔗糖酶、脲酶的活性,增加根际土壤中氮、磷、钾等大量元素的含量,其中“宁盾”A液与B液配合使用效果最佳.
为了解柴达木盆地茶卡盐湖、柯柯盐湖和小柴旦盐湖等三大硫酸镁亚型高盐盐湖可分离嗜盐耐盐菌的种群多样性,采用RM中、高盐培养基筛选分离可培养的嗜盐菌和耐盐菌,扩增16S rRNA基因序列进行种属鉴定和环境因子典范对应分析(CCA),选取优势菌属构建系统发育树,并采用高效液相色谱法(HPLC)检测次级代谢产物四氢嘧啶(Ectoine)积聚量,筛选高产菌株.结果表明三大盐湖共分离获得嗜盐和耐盐菌113株,优势种属为Bacillus(42株)、Staphylococcus(30株)和Halomonas(26株),各
植物体的各项生理活动依赖于分子水平上多种植物蛋白质/蛋白质复合体的相互作用和动态变化,了解这些蛋白质/蛋白质复合体的结构和功能对于研究相关植物生理活动的分子机理至关重要.得益于最近的技术进步——包括直接电子探测器的发展和先进的图像处理算法,冷冻电镜技术已经逐步发展成为研究蛋白质/蛋白质复合体的重要技术手段,这也为深入理解植物生理活动分子机理提供了结构生物学研究利器.目前,冷冻电镜技术在分子植物学研究领域的应用仍处于早期,对于一些重要蛋白质复合体的结构功能研究还不够深入.本文在对冷冻电镜技术发展历史进行简要
以新疆和田河流域为例,采取Mann-Kendall趋势检测法、Pettitt突变检测法与小波分析等方法剖析了研究区近60年气温、降雨和径流变动特点.结果显示:(1)研究区降水、气温和径流均有增加或升高趋势,其中气温变化呈显著增加;(2)研究区降水、气温、径流突变分别发生于1986年、1996年和1993年;(3)研究区降水、气温和径流均无显著性周期性变化,但存在短时间段周期变化,降水在研究时段内呈现丰枯交替变化,自20世纪90年代逐渐湿化.气温呈现逐渐升高的发展趋势.20世纪90年代以前,径流年代际变化以
研究干旱半干旱典型区域降水的动态变化及未来走向有助于应对气候变化.采取线性回归、Mann-Kendall趋势检验、小波分析的方法探讨青藏高原1961—2019年降水量的变化特征.结论如下:(1)降水量整体上均呈现增长趋向,春冬季上升趋势最强,且春季降水对年降水量贡献率存在骤增现象.(2)春冬两季的降水量和年降水量的趋势检验均为显著增加,降水量分别于1996年、1982年和1998年起快速上升,夏秋两季检验结果不显著.(3)年降水量震荡最显著的周期为1 a,结果亦显示未来降水处于偏高期.研究显示:青藏高原降
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干扰素在病毒性疾病的防治上,具有很高的临床应用前景.为了林麝干扰素的研究与应用,使用同源克隆方法首次克隆得到9条林麝干扰素α基因序列,序列全长均为570 bp,编码189个氨基酸,前23个氨基酸为信号肽,具有4个保守的半胱氨酸残基和5个保守的脯氨酸残基.9种亚型之间,核酸序列同源性为97.0％-99.6％,氨基酸序列同源性为93.7％-99.5％.蛋白结构主要由5个α-螺旋和无规则卷曲构成,三级结构与牛和人干扰素α高度相似.结构域预测包含干扰素受体IFNAR结合位点.首次构建了林麝干扰素α表达质粒并成功使