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[摘要] 目的 建立测定强骨片中淫羊藿苷含量的高效液相色谱法。 方法 色谱柱Kromasil100A C18 柱(250 mm× 4.6 mm,5 mm),以乙腈-水(28∶72)为流动相,检测波长为270 nm。 结果 淫羊藿苷检测浓度在1~128 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好,加样回收率为86.34%,RSD为13.77%(n=5)。 结论 高效液相色谱法简便、准确,可用于该制剂的质量控制。
[关键词] 淫羊藿苷;强骨片;高效液相色谱法
[中图分类号] R286.0 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616(2013)02-52-03
强骨片是用淫羊藿、骨碎补、龟板、补骨脂等中药材制备的中药复方制剂,具有强筋壮骨,预防骨质疏松的功效,用于调节中老年人因肾虚所致的性激素分泌不足而防止钙的流失,预防和治疗骨质疏松症。淫羊藿具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效[1-4],淫羊藿苷作为该方中臣药淫羊藿的主要成分,其含量将直接影响该药的疗效。因此,笔者采用高效液相色谱法对复方中药强骨片中的淫羊藿苷进行测定,为该制剂的质量控制提供客观的评价方法。为有效控制该药剂质量,采用高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量,以期建立复方中药强骨片的质量控制方法[5-6]。
1 材料与方法
1.1 仪器
岛津SHIMADZU高效液相色谱仪(LBM-10A),多功能粉碎机(ST-02A型,永康市帅通工具有限公司)
1.2 药品
淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号为110737-200415);强骨片(安徽省生物制药工程技术研究中心研制,批号分别为20102,20111,20112,20113,20114);乙腈为色谱纯,水为去离子水,甲醇为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Kromasil 100A C18柱(250 mm×4.6 mm,5 mm);流动相:乙腈-水(28∶72);流速:1.0 mL/min;检测波长:270 nm。
2.2 溶液制备
取所制备的强骨片15 g,用多功能粉碎机制成粉末,称取12.5 g,加入烧瓶中,加甲醇40 mL,环流1 h,滤过,重复3次,合并滤液,冷至室温并移至100 mL量瓶中,加甲醇定溶至100 mL,0.22 μm滤膜过滤,滤液即供试品溶液。精密称取淫羊藿苷对照品适量,加甲醇制成每1毫升含0.14 mg的溶液,作为对照品溶液。按强骨片制备工艺,制备缺淫羊藿的阴性样品,按照供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。
2.3 方法学考察
线性关系考察:精密吸取浓度(μg/mL)为1、2、4、8、16、32、64、128的对照品溶液20 μL,注入液相色谱仪,以淫羊藿苷进样浓度(μg/mL)为横坐标峰面积为纵坐标(Y)进行回归分析,得回归方程Y=27 916X-12 196,r=0.999 5(n=8)。结果表明,淫羊藿苷进样浓度在1~128 μg/mL范围内线性关系良好。R2=0.999 5。
2.4 专属性试验
取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液,按上述相同的色谱条件分别进样。结果,供试品溶液中淫羊藿苷与杂质分离完全,分离度高;阴性对照无干扰。保留时间为20.92 min,色谱见图2。专属性考察:照上述色谱条件,取对照品溶液、
图1 淫羊藿苷对照品的线性回归方程
供试品溶液、阴性对照品溶液各20 μL,分别注入高效液相色谱仪,供试品溶液色谱图与对照品溶液色谱图在同一保留时间有一相同色谱峰出现,阴性对照品在此保留时间无吸收峰,阴性对照品对测定无干扰。见图2。
A.对照品溶液32 μg/mL
B.供试品溶液
C.阴性对照品溶液
A:对照品溶液32 μg/mL;B:供试品溶液;C:阴性对照品溶液
图2 淫羊藿苷高效液相色谱图
2.5 精密度试验
取对照品溶液1 mL置于离心管中,用进样针重复进样5次。经数据处理,峰面积的RSD为0.92%,表明该方法重复性好。
2.6 稳定性试验
供试品溶液1 mL置于离心管中,于0、3、6、9、24、36 h时进样,数据处理结果显示,淫羊藿苷峰面积的RSD为0.71%,供试品溶液在36 h之内具有稳定性。
2.7 重现性试验
取批号为20102的强骨片5份,按照同一测定方法测定此批次强骨片中淫羊藿苷的峰面积,用外标法计算淫羊藿苷的含量。平均含量的计算结果为0.193 6 mg/g,RSD为1.30%,该方法重复性良好。
2.8 加样回收率试验
所制备的5个批次的药品(批号为20102,20111,20112,20113,20114)各取1份,依供试品溶液制备方法制备溶液,分别加入淫羊藿苷对照品混合均匀,测定含量,计算加样回收率。见表1。
2.9 样品含量测定
样品含量测定取5批样品,按溶液制备项下方法制备供试品溶液,并按上述色谱条件测定含量。结果批号为20102,20111,20112,20113,20114的样品中,每克药粉中淫羊藿苷含量分别为0.192 0、0.215 8、0.186 2、0.201 3、0.177 1 mg/g。
3 讨论
本实验选用的测定方法是参照中国药典(2005年版)规定的方法进行的[7]淫羊藿苷的检测波长选为270 nm。对照品、供试品的淫羊藿苷吸收峰的峰型相同,供试品中淫羊藿苷的色谱峰与相邻色谱峰分离良好,与阴性对照品吸收峰没有干扰。
国家食品药品监督管理局的《新药审批办法》规定,质量标准研究应以检测方中君、臣药为主,顾此选则方中臣药淫羊藿苷的含量作为检测指标,通过查阅大量文献,选择Kromasil 100A C18柱为色谱柱进行检测。流动相乙腈/水之比为 28∶72。
目前,国内大多数厂家仍然采用紫外法对中药复方制剂中有效成分进行含量测定,虽然简便、快捷,但干扰因素多,准确度差。高效液相色谱法测定强骨片中淫羊藿苷的含量,准确度高,有利于对强骨片的质量有效控制[8-10]。
[参考文献]
[1] 唐德智.仙乐雄胶囊中淫羊藿的质量控制[J].中国实验方剂学杂志,2009,15(11):29-30.
[2] 蔡鸿飞,高幼衡,刘军,等.HPLC法测定前列舒乐颗粒中淫羊藿苷的含量[J].中药新药与临床药理,2008,19(4):307-308.
[3] 曾宝,黄晓其,苏子仁.HPLC法同时测定益肾灵颗粒中淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素的含量[J].中国药房,2008,19(6):442.
[4] 高红利,张京平,段金菊,等.HPLC法测定益气宁神滴丸中淫羊藿苷的含量[J].中国药房,2011,22(15):1396-1397.
[5] 蒋叔霏.高效液相色谱法测定消渴灵片中盐酸小檗碱含量[J].安徽医药,2012,16(6):766-767.
[6] 谢若男,杨满琴,徐玥玮,等.十一味活血酊质量标准研究[J].安徽医药,2012,16(6):768-769.
[7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2005:229.
[8] 贾丹兵,刘珊,李乃民,等.HPLC测定参姜锁阳益气片中淫羊藿苷的含量[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(1):35-36.
[9] 池玉梅,冯亮,张爱华.HPLC法测定巴戟胶囊中淫羊藿苷含量[J].南京中医药大学学报,2006,22(6):384.
[10] 肖佳尚.HPLC法测定复方益肾胶囊中淫羊藿苷的含量[J].药品鉴定2011,8(16):68-70.
(收稿日期:2012-12-17)
[关键词] 淫羊藿苷;强骨片;高效液相色谱法
[中图分类号] R286.0 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616(2013)02-52-03
强骨片是用淫羊藿、骨碎补、龟板、补骨脂等中药材制备的中药复方制剂,具有强筋壮骨,预防骨质疏松的功效,用于调节中老年人因肾虚所致的性激素分泌不足而防止钙的流失,预防和治疗骨质疏松症。淫羊藿具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效[1-4],淫羊藿苷作为该方中臣药淫羊藿的主要成分,其含量将直接影响该药的疗效。因此,笔者采用高效液相色谱法对复方中药强骨片中的淫羊藿苷进行测定,为该制剂的质量控制提供客观的评价方法。为有效控制该药剂质量,采用高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量,以期建立复方中药强骨片的质量控制方法[5-6]。
1 材料与方法
1.1 仪器
岛津SHIMADZU高效液相色谱仪(LBM-10A),多功能粉碎机(ST-02A型,永康市帅通工具有限公司)
1.2 药品
淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号为110737-200415);强骨片(安徽省生物制药工程技术研究中心研制,批号分别为20102,20111,20112,20113,20114);乙腈为色谱纯,水为去离子水,甲醇为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Kromasil 100A C18柱(250 mm×4.6 mm,5 mm);流动相:乙腈-水(28∶72);流速:1.0 mL/min;检测波长:270 nm。
2.2 溶液制备
取所制备的强骨片15 g,用多功能粉碎机制成粉末,称取12.5 g,加入烧瓶中,加甲醇40 mL,环流1 h,滤过,重复3次,合并滤液,冷至室温并移至100 mL量瓶中,加甲醇定溶至100 mL,0.22 μm滤膜过滤,滤液即供试品溶液。精密称取淫羊藿苷对照品适量,加甲醇制成每1毫升含0.14 mg的溶液,作为对照品溶液。按强骨片制备工艺,制备缺淫羊藿的阴性样品,按照供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。
2.3 方法学考察
线性关系考察:精密吸取浓度(μg/mL)为1、2、4、8、16、32、64、128的对照品溶液20 μL,注入液相色谱仪,以淫羊藿苷进样浓度(μg/mL)为横坐标峰面积为纵坐标(Y)进行回归分析,得回归方程Y=27 916X-12 196,r=0.999 5(n=8)。结果表明,淫羊藿苷进样浓度在1~128 μg/mL范围内线性关系良好。R2=0.999 5。
2.4 专属性试验
取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液,按上述相同的色谱条件分别进样。结果,供试品溶液中淫羊藿苷与杂质分离完全,分离度高;阴性对照无干扰。保留时间为20.92 min,色谱见图2。专属性考察:照上述色谱条件,取对照品溶液、
图1 淫羊藿苷对照品的线性回归方程
供试品溶液、阴性对照品溶液各20 μL,分别注入高效液相色谱仪,供试品溶液色谱图与对照品溶液色谱图在同一保留时间有一相同色谱峰出现,阴性对照品在此保留时间无吸收峰,阴性对照品对测定无干扰。见图2。
A.对照品溶液32 μg/mL
B.供试品溶液
C.阴性对照品溶液
A:对照品溶液32 μg/mL;B:供试品溶液;C:阴性对照品溶液
图2 淫羊藿苷高效液相色谱图
2.5 精密度试验
取对照品溶液1 mL置于离心管中,用进样针重复进样5次。经数据处理,峰面积的RSD为0.92%,表明该方法重复性好。
2.6 稳定性试验
供试品溶液1 mL置于离心管中,于0、3、6、9、24、36 h时进样,数据处理结果显示,淫羊藿苷峰面积的RSD为0.71%,供试品溶液在36 h之内具有稳定性。
2.7 重现性试验
取批号为20102的强骨片5份,按照同一测定方法测定此批次强骨片中淫羊藿苷的峰面积,用外标法计算淫羊藿苷的含量。平均含量的计算结果为0.193 6 mg/g,RSD为1.30%,该方法重复性良好。
2.8 加样回收率试验
所制备的5个批次的药品(批号为20102,20111,20112,20113,20114)各取1份,依供试品溶液制备方法制备溶液,分别加入淫羊藿苷对照品混合均匀,测定含量,计算加样回收率。见表1。
2.9 样品含量测定
样品含量测定取5批样品,按溶液制备项下方法制备供试品溶液,并按上述色谱条件测定含量。结果批号为20102,20111,20112,20113,20114的样品中,每克药粉中淫羊藿苷含量分别为0.192 0、0.215 8、0.186 2、0.201 3、0.177 1 mg/g。
3 讨论
本实验选用的测定方法是参照中国药典(2005年版)规定的方法进行的[7]淫羊藿苷的检测波长选为270 nm。对照品、供试品的淫羊藿苷吸收峰的峰型相同,供试品中淫羊藿苷的色谱峰与相邻色谱峰分离良好,与阴性对照品吸收峰没有干扰。
国家食品药品监督管理局的《新药审批办法》规定,质量标准研究应以检测方中君、臣药为主,顾此选则方中臣药淫羊藿苷的含量作为检测指标,通过查阅大量文献,选择Kromasil 100A C18柱为色谱柱进行检测。流动相乙腈/水之比为 28∶72。
目前,国内大多数厂家仍然采用紫外法对中药复方制剂中有效成分进行含量测定,虽然简便、快捷,但干扰因素多,准确度差。高效液相色谱法测定强骨片中淫羊藿苷的含量,准确度高,有利于对强骨片的质量有效控制[8-10]。
[参考文献]
[1] 唐德智.仙乐雄胶囊中淫羊藿的质量控制[J].中国实验方剂学杂志,2009,15(11):29-30.
[2] 蔡鸿飞,高幼衡,刘军,等.HPLC法测定前列舒乐颗粒中淫羊藿苷的含量[J].中药新药与临床药理,2008,19(4):307-308.
[3] 曾宝,黄晓其,苏子仁.HPLC法同时测定益肾灵颗粒中淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素的含量[J].中国药房,2008,19(6):442.
[4] 高红利,张京平,段金菊,等.HPLC法测定益气宁神滴丸中淫羊藿苷的含量[J].中国药房,2011,22(15):1396-1397.
[5] 蒋叔霏.高效液相色谱法测定消渴灵片中盐酸小檗碱含量[J].安徽医药,2012,16(6):766-767.
[6] 谢若男,杨满琴,徐玥玮,等.十一味活血酊质量标准研究[J].安徽医药,2012,16(6):768-769.
[7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2005:229.
[8] 贾丹兵,刘珊,李乃民,等.HPLC测定参姜锁阳益气片中淫羊藿苷的含量[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(1):35-36.
[9] 池玉梅,冯亮,张爱华.HPLC法测定巴戟胶囊中淫羊藿苷含量[J].南京中医药大学学报,2006,22(6):384.
[10] 肖佳尚.HPLC法测定复方益肾胶囊中淫羊藿苷的含量[J].药品鉴定2011,8(16):68-70.
(收稿日期:2012-12-17)