【摘 要】
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目的构建变异链球菌clpC缺陷突变株，检测该基因对变异链球菌感受态形成的影响。方法分别以变异链球菌UA159基因组和pIB107质粒为模板，PCR扩增clpC基因片段和卡那霉素基因盒(lox71-KMR-lox66)；将clpC基因片段插入pMD-19T simple载体，经ClaⅠ/EcoRⅠ酶切、补平后连入卡那霉素基因盒，构建clpC缺陷突变同源重组载体pCKX2；SalⅠ线性化pCKX2并转
【机 构】
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361001 厦门大学附属第一医院暨福建医科大学厦门市第一教学医院检验科；363000 福建医科大学附属漳州市医院检验科,361001 厦门大学附属第一医院暨福建医科大学厦门市第一教学医院检验科,36
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目的构建变异链球菌clpC缺陷突变株，检测该基因对变异链球菌感受态形成的影响。
方法分别以变异链球菌UA159基因组和pIB107质粒为模板，PCR扩增clpC基因片段和卡那霉素基因盒(lox71-KMR-lox66)；将clpC基因片段插入pMD-19T simple载体，经ClaⅠ/EcoRⅠ酶切、补平后连入卡那霉素基因盒，构建clpC缺陷突变同源重组载体pCKX2；SalⅠ线性化pCKX2并转化变异链球菌，卡那霉素筛选阳性菌落；质粒pCrePA转化阳性菌株，30℃培养剔除卡那霉素基因盒；37℃培养去除pCrePA，获得clpC缺陷突变株，PCR和测序鉴定；提取细菌总RNA并逆转录成cDNA，用RT-PCR法扩增clpC缺失序列的核苷酸片段并进行产物的电泳分析；pDL276分别转化变异链球菌和clpC缺陷突变株，观察感受态细胞形成变化。
结果PCR和测序结果证实成功构建同源重组载体pCKX2及变异链球菌clpC缺陷突变株；RT-PCR结果显示，△clpC缺失的核苷酸片段PCR产物电泳结果并无相应的条带出现；clpC缺陷突变株的感受态形成期延迟并延长维持期。
结论clpC基因具有负调控变异链球菌晚期感受态细胞形成的作用。
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