【摘 要】
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目的:建立反映泛素蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)功能的GFPu-1细胞系.方法:将GFPu质粒,转染HEK293细胞,通过G418筛选培养出含GFPu的克隆细胞系GPPu-1,加入
【机 构】
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南京大学医学院鼓楼医院心脏科,江苏,南京,210008;Caridovascular Research Institute,University of South Dakota,Sioux Falls
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目的:建立反映泛素蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)功能的GFPu-1细胞系.方法:将GFPu质粒,转染HEK293细胞,通过G418筛选培养出含GFPu的克隆细胞系GPPu-1,加入蛋白酶抑制剂lactacystin,通过共聚焦显微镜和Western印迹观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达和分布.结果:加入lactacystin后,GFPu转染细胞荧光强度明显增强,GFPu在胞浆和细胞核分布均匀,且GFPu和β-catenin明显积聚,GFPu增加了约2.5倍(P<0.05),β-catenin增加了约1.2倍(P<0.05).结论:GFPu-1克隆细胞是一种反映UPS功能的敏感指标.
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