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(上接2001年第3期)rn1 概述rn电泳是指带电粒子在电场作用下发生差速迁移的电动现象.利用这种现象对某些化学或生物化学组分进行分离和分析的技术称之为电泳技术.按有无固体支持物分类,电泳分为自由电泳和支持物电泳两大类.自由电泳又称自由界面电泳(Free boundary electrophoresis).由于电泳过程中产生的焦尔热会引起溶液对流、区带扰乱,使电泳的分辩率降低,所以才出现了支持物电泳,用纸、醋酸纤维素、聚丙烯酰胺等稳定介质做为支持物,这些支持物不仅能起到很好的抗对流作用,而且还能起到筛分作用,因此支持物电泳具有很高的分辩率.毛细管电泳(Capillary electrophoresis,CE)是自由溶液电泳的一种改进形式,是电泳技术和色谱技术相结合的产物.与HPLC相比,毛细管电泳具有操作简单,试样需要量少,分离效率高,运行成本低等优点.目前,毛细管电泳已广泛应用于氨基酸、肽、蛋白质和核酸等离子型生物大分子的分离分析,加入表面活性剂还可以扩大到中性粒子,甚至应用到细胞和病毒等的分离.同时在小分子化合物的分离分析方面也取得了重大进展.rn2 毛细管电泳装置rnCE的装置示意图见图1.rn图1 毛细管电泳装置示意图rn毛细管电泳装置主要包括直流高压电源、毛细管、进样装置、检测器和记录仪等主要部件.高压电源可对毛细管施加5～50 kV电压,操作电压一般控制在5～30 kV范围.CE通常使用内径10～100 μm、长12～120 cm(内涂聚酰亚胺)弹性融凝石英毛细管,毛细管的两端分别浸泡在含有缓冲溶液的贮液槽中,毛细管内也充满同样的缓冲溶液.在毛细管的出口端装有在线检测器,如果采用光学检测方式,就将毛细管一端的聚酰亚胺涂层烧去一小段(0.5 cm左右)作为检测窗口.被分析试样可以采用重力法、抽真空法或电迁移法等多种进样方式由毛细管一端进入.rn2.1 毛细管电泳的几种分离模式rnCE的分离模式主要有三种.rn2.1.1 自由区带电泳rn自由区带电泳(Free zone electrophoresis,FZE)是一种最基一种离子按照自己的特征速度朝向阳极或阴极移动,如果毛细管内璧有涂层,不存在电渗流,则中性分子完全不移动.引起电渗流的原因将在下面3.1中叙述.rn如果采用没有涂层的毛细管,则离子的迁移速度由电泳速度和电渗流速度组成.通常电渗流速度大于电泳速度,而且电渗流的移动方向朝向阴极,因此不管溶质是阳离子还是阴离子,所有的分子都朝向阴极移动,但阳离子的表观流速比电渗流速度快,阴离子的表观流速比电渗流速度慢,而中性分子的表观流速与电渗流速度相同.rn2.1.2 等电聚焦电泳rn等电聚焦电泳[Isoelectric focussing (IEF) electrophoresis],是一种非常重要的分离技术,主要用于分离两性化合物.在毛细管中放入载体两性电解质(它是一种人工合成的、具有不同等电点的复杂混合物),通以直流电后,即形成从阳极到阴极逐步增加的pH梯度.而被分离物质进入此体系后,在电场作用下,迁移至其等电点的pH区域时,便停止移动,各组分被分别聚焦于相当其等电点pH的位置上,形成位置明显不同的区带,分辨率很高. rn