【摘 要】
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目的构建犬转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)的真核表达载体,转染中国仓鼠卵巢CHO细胞,建立稳定表达犬TfR的CHO-TfR细胞系。方法从犬腺细胞系(WRD)提取总RNA,逆转录合
【机 构】
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宁夏医科大学生物化学与分子生物学系宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室,宁夏医科大学总医院呼吸与危重医学科,
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目的构建犬转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)的真核表达载体,转染中国仓鼠卵巢CHO细胞,建立稳定表达犬TfR的CHO-TfR细胞系。方法从犬腺细胞系(WRD)提取总RNA,逆转录合成cDNA,采用PCR方法扩增TfR基因,将其克隆至真核表达载体pCDNA3,酶切和测序鉴定;利用脂质体法转染CHO细胞,通过RT-PCR、Western blot及免疫荧光法检测TfR的表达。结果构建的pCDNA3-TfR重组质粒经过酶切和测序鉴定,TfR基因序列成功插入到pCDNA3载体,且无突变。转染CHO细胞后,RT-PCR、Western blot及免疫荧光法检测TfR表达阳性,成功建立了稳定表达犬TfR的CHO-TfR细胞系。结论成功构建了真核表达载体pCDNA3-TfR,并获得了稳定表达TfR的CHO-TfR细胞系。
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