【摘 要】
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目的建立人醛糖还原酶(AR)及其与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达的酿酒酵母细胞表达株,检测细胞中目的基因的表达及蛋白活性。方法将含目的基因AR及融合基因AR::GFP的重组质粒pYE
【机 构】
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解放军总医院老年血液科,解放军总医院老年医学研究所
【基金项目】
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国家自然科学基金(30472172)~~
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目的建立人醛糖还原酶(AR)及其与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达的酿酒酵母细胞表达株,检测细胞中目的基因的表达及蛋白活性。方法将含目的基因AR及融合基因AR::GFP的重组质粒pYEX-BX转化酵母细胞INVSc1,得到宿主菌株XAR,XAG及对照菌株YEX。观察酵母细胞生长曲线及GFP荧光信号;Northern blot检测细胞中AR mRNA转录;Western blot检测AR蛋白表达;荧光法测定AR活性。结果三菌株生长速率无明显差异;XAG菌株相对荧光强度与生长时间成线性关系;XAR,XAG菌株分别有持续、稳定的目的基因mRNA转录及目的蛋白表达,并具有AR活性。结论成功构建了AR基因的酵母表达株,为进一步将此细胞株应用于研究AR的致病机制及AR抑制剂的初步筛选打下基础。
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