马铃薯茎尖脱毒的方法

来源 :中国农业信息 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Ling_Hun
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  马铃薯茎尖脱毒的方法,在具体操作上各单位尚不完全一致,现介绍其主要的程序和方法。
  一、切取茎尖
  从大田直接切取10~15厘米长的茎尖,或选取块茎彻底冲洗后播在装有消毒泥砂的生长箱中,用32℃催芽。当块茎出芽长约30厘米时,切取带顶芽或侧芽的茎段约10~15厘米备用。
  二、茎尖消毒
  茎尖先用自来水冲洗干净后,用70%的酒精浸2分钟。再用5%次氯酸钙滤液浸泡20分钟,然后用蒸馏水冲洗3次。
  三、培养基
  马铃薯茎尖分生组织的培养基,一般均采用MS培养基的基本配方,而在添加剂上作不同的调整。MS培养基的配方如表11-2。据试验,在MS培养基的基础上添加剂调整为加吲哚乙酸0.5毫克/升和6-苄基嘌呤2毫克/升的存活率高达81.7%,优于同比例高浓度的处理。又据试验,添加6-苄基嘌呤0.5毫克/升和吲哚乙酸0.1毫克/升,再加赤霉素1毫克/升的比例适合马铃薯茎尖培养;添加6-苄基嘌呤0.1-0.3毫克/升和吲哚乙酸0.1毫克/升适合发根培养。同时证明浓度不能过大,否则茎尖分生组织生长过旺,大量形成愈伤组织,影响芽的分化。
  茎尖发芽生根后仍用MS培养基全量进行单节繁殖和增代培养。
  四、培养条件
  经过消毒的茎尖,在超净工作台上的解剖镜下剥离,并切取0.3毫米左右,接种在培养基上。茎尖越大,越易成活,脱毒效果越差。反之,成活困难,脱毒效果好。接种后培养室的温度一般为30℃左右。也有采取白天温度29℃,晚上温度24℃变温培养的。光照强度接种后前半月为1000~2000勒克司,后半月为3000~5000勒克司。光周期10~16小时,一般为12小时。培养室的相对湿度为50~85%。茎尖苗可以在试管内连续进行无菌培养繁殖,待自然温度适合马铃薯生长后,将试管移出室外,揭开瓶塞进行炼苗。然后移入消毒营养土中栽植,避免日光直射。幼苗用纱布覆盖,以保持较高湿度和防止传毒媒介,以后再移入网室继续育苗,并移栽产生无毒种薯。
  五、脱毒苗的检验
  脱毒苗较带毒苗均有不同程度的增产,但尚不能据以确认其为无毒苗。一般以巴西牵牛(Ipomoea setosa)、裂叶牵牛(I.nil)作指示植物进行测定。据国际热带农业研究所的经验,将3~5厘米高的试管苗移至颗粒泥碳中,保持在湿度较高的玻璃箱内炼苗1周,然后栽入口径15厘米,装消毒土壤的小缽中,移入防虫隔离室。1~2月后,将其嫁接于隔离生长的巴西牵牛实生苗上,观察跕木的症状发展。当接穗带毒时,跕木在嫁接后12~21天内表现出叶脉退绿、条斑、皱缩等不同症状,生长发育受阻。再将跕木无症状的马铃薯茎尖,继续与巴西牵牛嫁接,连续3次均未表现症状的,再用电子显微镜检查有无病毒颗粒子。如仍表现无毒时,即可在培养基上进行单节繁殖。这种无病毒的马铃薯苗既可作良种繁育的原原种,又可作为国际交换的种质资源。
  
  作者姓名:赵拉梅(1971。12),女,山西省太原市古交市人,学历:大专,农业广播学校,农技推广专业,职称:助理农艺师,研究方向:农业技术推广。
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