评价1-磷酯酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路在内毒素攻击大鼠肺泡上皮细胞时一氧化碳(CO)上调线粒体融合蛋白表达中的作用。
方法将肺泡上皮细胞用含10%胎牛血清的1%青链双抗F12K完全培养基于37 ℃、5%CO2的培养箱中培养，采用随机数字表法分为10组(n＝5)：对照组(C组)；内毒素组(L组)向培养基中加入10 μg/ml脂多糖(LPS); LPS＋外源性CO释放剂CORM-2组(L＋CO组)向培养基中加入CORM-2 100 μmol/L，1 h后向培养基中加入10 μg/ml LPS；LPS＋PI3K抑制剂LY294002组(L＋LY组)向培养基中加入25 μmol/L LY294002，1 h后向培养基中加入10 μg/ml LPS；LPS＋外源性CO释放剂CORM-2＋PI3K抑制剂LY294002组(L＋CO＋LY组)向培养基中加入25 μmol/L LY294002，1 h后向培养基中加入CORM-2 100 μmol/L，1 h后向培养基中加入10 μg/ml LPS；LPS＋无活性的CO释放剂iCORM-2组(L＋iCO组)向培养基中加入iCORM 100 μmol/L，1 h后向培养基中加入10 μg/ml LPS；LPS＋二甲基亚砜(DMSO)组(L＋D组)向培养基中加入等浓度DMSO，1 h后加入1 μg/ml LPS；外源性CO释放剂CORM-2组(CO组)向培养基中加入CORM-2 100 μmol/L；PI3K抑制剂LY294002组(LY组)向培养基中加入25 μmol/L LY294002；外源性CO释放剂CORM-2＋PI3K抑制剂LY294002组(CO＋LY组)向培养基中加入25 μmol/L LY294002，1 h后向培养基中加入CORM-2 100 μmol/L。孵化24 h后收集细胞，检测MDA含量和SOD活性，采用Western blot法检测血红素氧合酶-1(HO-1)、磷酸化Akt(p-Akt)、线粒体融合蛋白1(Mfn1)、Mfn2和视神经萎缩蛋白1(OPA1)的表达。
结果与C组比较，L组、L＋CO组、L＋LY组、L＋CO＋LY组、L＋iCO组、L＋D组MDA含量升高，SOD活性降低，L组HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1、p-Akt表达上调(P<0.05)；与L组比较，L＋CO组MDA含量降低，SOD活性升高，L＋LY组MDA含量升高，SOD活性降低，L＋CO组HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1、p-Akt表达上调，L＋LY组HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1、p-Akt表达下调(P<0.05)；与L＋CO组比较，L＋CO＋LY组MDA含量升高，SOD活性降低，HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1、p-Akt表达下调(P<0.05)。
结论内毒素攻击大鼠肺泡上皮细胞时CO上调线粒体融合蛋白表达的机制与激活PI3K/Akt信号通路有关。