番木瓜蛋氨酸亚砜还原酶B1(PaMsrB1)的真核表达及其活性检测

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在生物和非生物逆境下,植物蛋氨酸亚砜还原酶B1(methionine sulfoxide reductase B1, MsrB1)具有修复叶绿体中被氧化蛋白的功能。本研究首次利用毕赤酵母真核表达系统,胞外分泌表达了番木瓜MsrB1(PaMsrB1)重组蛋白,并通过Ni2+-NTA-琼脂糖亲和层析柱获得了纯化蛋白。Western blot结果显示,在预期大小(22.7 kD)出现特异性条带,表明表达纯化的蛋白为PaMsrB1重组蛋白。通过H2O2氧化胁迫和薄层层析实验,从体内和体外证明了获得的重组PaMsrB1具有抗氧化能力和还原酶活性。研究结果可为进一步研究PaMsrB1在番木瓜叶绿体中抗氧化机制奠定了基础。“,”Plant methionine sulfoxide reductase B1 (MsrB1) play a critical role in repairing Oxidized chloroplast protein in biotic and abiotic stress. In this study, recombinant papaya MsrB1 (PaMsrB1) was successfully expressed in pichia eukaryotic expression system, and purified by Ni2+-NTA agarose affinity chromatography. western blot revealed that purified recombinant protein was a single protein of the predicted size (22.7 kD). A protection detect-ion against H2O2-mediated stress and thin layer chromatography assay indicated that recombinant PaMsrB1 has antioxidant capacity and reductase activity in vivo and in vitro, which lay a foundation of further study on the mechanism of PaMsrB1 antioxidant in papaya chloroplasts.
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