目的对尿液多肽组提取方法进行优化,简化尿液多肽组样品的制备流程,提高多肽的富集效率与鉴定数量,为潜在的临床生物标志物筛选提供技术支持。方法将3 ml尿液样品经超滤管[截留量为10×103相对分子质量(Mr)]离心后得到流穿液,通过脱盐层析柱(PD-10)除去流穿液中的盐及尿黄素等小分子成分,得到多肽组样品,然后利用纳升高效液相色谱-高分辨串联质谱(nano-UPLC-MS/MS)进行检测。为提高多肽组的测序深度,可提高尿液样品起始量(如10～40 ml),经过超滤管离心后,利用反相色谱柱(Oasis HLB固相萃取柱)进行富集浓缩,经PD-10脱盐和Stage Tip分离后,得到可用于质谱检测的尿液多肽组样品。研究中处理尿液样品总时间控制在4～6 h,脱盐过程简单,在10 ml尿液样品中最多鉴定到归属于261种蛋白的1810条肽段。结果使用10×103Mr截留量超滤管所得多肽样品鉴定到的肽段数量是3×103Mr截留量超滤管的1. 5倍,同时,前者可有效缩短样品处理时间;使用PD-10层析柱能有效地除去尿液样品中的尿黄素等小分子物质,提高了质谱检测效率;质谱数据分析选用p Find开放式搜库模式,与MaxQuant相比能显著提高多肽的鉴定率,且搜库耗时显著缩短;利用定量蛋白质组学策略,评估了该方法对多肽的回收效率,其平均回收效率> 50%,最高> 90%。结论通过对尿液多肽组富集与检测的各个环节的测试与优化,显著降低了尿液多肽组的检测时间和成本,简化了实验操作流程,所需尿液样品体积更小,同时可实现较高规模的多肽组测序覆盖度,为筛选潜在的疾病生物标志物提供了技术支撑。