【摘 要】
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目的 观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对小鼠肾小球足细胞RhoA激酶1(ROCK1)表达和活性的影响,并初步探讨ROCK1在ox-LDL诱导的足细胞损伤中的作用.方法 体外培养小鼠条件永生性
【机 构】
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南方医科大学研究生学院,广州,510515广东省人民医院肾内科广东省医学科学院,广州,510515;
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目的 观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对小鼠肾小球足细胞RhoA激酶1(ROCK1)表达和活性的影响,并初步探讨ROCK1在ox-LDL诱导的足细胞损伤中的作用.方法 体外培养小鼠条件永生性足细胞,以ox-LDL 20 μg/ml刺激足细胞24h,采用Western印迹法检测正常对照组、ox-LDL刺激组、ROCK1 siRNA+ox-LDL组以及ROCK1过表达(wtROCK1)+ox-LDL组磷酸化肌球蛋白磷酸化亚单位(p-MYPT)、nephrin、LC3-Ⅱ、p62、磷酸化(p)-ULK1(ULK1是一种丝/苏氨酸氨酸激酶)的表达水平;Dil-ox-LDL与足细胞共孵育4h,荧光显微镜观察各组足细胞脂质的含量情况.结果 与对照组相比,ox-LDL刺激增加足细胞ROCK活性,同时伴有nephrin、LC3-Ⅱ表达下降(P＜0.05),p62、p-ULK1表达上升(P＜0.05),细胞内胆固醇含量增加(P＜0.05).增加ROCK1表达能进一步增加ox-LDL诱导的p-MYPT水平,并进一步降低nephrin、LC3-Ⅱ的表达,增加p62、p-ULK1的表达(P＜0.05)和细胞内胆固醇含量(P＜0.05);与之相反,抑制ROCK1表达能抑制ox-LDL诱导的p-MYPT水平上调,同时上调nephrin、LC3-Ⅱ的表达(P＜0.05),下调p62、p-ULK1的表达(P＜0.05),降低细胞内胆固醇含量(P＜0.05).结论 ROCK1介导的脂质自噬障碍是ox-LDL诱导足细胞损伤的重要途径.
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