【摘 要】
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目的:构建带有myc标签的核输入蛋白(importin) α/β的真核表达载体,转染人胚肾293T细胞并分析其表达.方法:以乳腺癌文库为模板PCR扩增核输入蛋白α/β基因,扩增产物插入真核
【机 构】
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吉林大学药学院,首都医科大学附属北京世纪坛医院肿瘤内科,军事医学科学院生物工程研究所
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目的:构建带有myc标签的核输入蛋白(importin) α/β的真核表达载体,转染人胚肾293T细胞并分析其表达.方法:以乳腺癌文库为模板PCR扩增核输入蛋白α/β基因,扩增产物插入真核表达载体pXJ-40-myc,经双酶切和测序鉴定;将空载体与重组质粒分别转染人胚肾293T细胞,通过Western印迹和免疫荧光技术检测核输入蛋白α/β的表达.结果:酶切鉴定与测序结果表明构建的myc-Importin α/β真核表达载体正确;Western印迹检测到重组质粒在293T细胞中的表达;免疫荧光检测到核输入蛋白o定位于细胞质和细胞核,而核输入蛋白β定位于细胞核.结论:构建了核输入蛋白α/β的真核表达载体,并确定了其在细胞中的表达定位.
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