【摘 要】
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目的 构建表达中国B｀/C和A/E重组亚型HIV-1 pol基因的DNA疫苗,并比较其免疫原性.方法 按哺乳动物密码子使用频率对HIV-1 CN54( BVC重组亚型)与AE2f( A/E重组亚型)的pol基因进
【机 构】
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上海市公共卫生临床中心科学研究部,复旦大学生物医学研究院
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目的 构建表达中国B｀/C和A/E重组亚型HIV-1 pol基因的DNA疫苗,并比较其免疫原性.方法 按哺乳动物密码子使用频率对HIV-1 CN54( BVC重组亚型)与AE2f( A/E重组亚型)的pol基因进行序列优化,构建DNA疫苗,通过Western blotting验证其体外表达效率.通过肌肉注射途径免疫小鼠,然后无菌分离小鼠脾淋巴细胞并分别在Consensus B Pol和HIV-I AE2f Pol肽库刺激下,采用酶联免疫斑点技术(ELISPOT)检测抗原特异性IFN-γ的分泌情况,观察比较两个DNA疫苗免疫原性特征.结果 DNA测序结果表明两个pol基因重组质粒构建正确,且两个DNA疫苗均能在体外有效表达.Consensus B Pol肽库刺激后,pSVAE-Pol活化的总T细胞免疫反应为(636±178)个斑点形成细胞数/106个脾淋巴细胞,pSVCN-Pol活化的总T细胞免疫反应为(468±265)个斑点形成细胞数/106个脾淋巴细胞(P=0.412)；HIV-1 AE2f Pol肽库刺激后,pSVAE-Pol活化的总T细胞免疫反应为(1378±611)个斑点形成细胞数/106个脾淋巴细胞,pSVCN -Pol活化的总T细胞免疫反应为(713±61)个斑点形成细胞数/106个脾淋巴细胞(P =0.134).将总T细胞反应按肽池分解后发现,pSVAE-Pol活化的特异性T细胞反应主要集中于Pol1肽池；而pSVCN-Pol除了能够活化针对Pol 1的T细胞反应之外,也可以较好地活化针对Consensus B Pol 2肽池的T细胞反应.结论 两个亚型Pol DNA疫苗中以AE-Pol的免疫原性更强,但其所活化的T细胞表位识别谱不及CN-Pol广泛.HIV-1疫苗可能需将两者结合在一起.
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