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【摘 要】 目的：观察不同剂量醋酸泼尼松对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的抗炎作用。方法：将40只小鼠平均分成4组，每组10只，一组为空白对照组，另外3组分别给予高、中、低剂量的醋酸泼尼松连续3天灌胃给药，每天1次分别剂量为40 mg/kg、20 mg/kg、10 mg/kg，观察醋酸泼尼松对小鼠耳肿胀和毛细血管通透性的影响。结果：醋酸泼尼松有较强的降低小鼠耳肿胀程度和减小毛细血管的通透性作用。结论：醋酸泼尼松具有较强的抗炎作用。
【关键词】 醋酸泼尼松 抗炎 研究
醋酸泼尼松为肾上腺皮质激素类药，具有抗炎、抗过敏、抗风湿、免疫抑制等作用，临床上主要用于类风湿性关节炎、风湿热、哮喘持续状态、肾病综合征、溃疡性结肠炎等。通过动物实验，观察不同剂量醋酸泼尼松对于二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和毛细血管通透性的影响[1-3]，初步探讨不同剂量醋酸泼尼松量效上的差异，并希望能为推进醋酸泼尼松的临床推广提供理论支持。
1 材料与方法
1.1 动物与分组
KM小鼠40只，雄性，18～22g，由广州中医药大学实验动物中心提供，先适应性饲养1 周，再随机分为4组，Ⅰ组（醋酸泼尼松高剂量组）、Ⅱ组（醋酸泼尼松中剂量组）、Ⅲ组（醋酸泼尼松低剂量组）、Ⅳ组（空白对照组），每组各10只。
1.2 药物
醋酸泼尼松注射液（浙江仙琚制药股份有限公司，批号20120810；用生理盐水稀释成相应浓度）、生理盐水。
1.3 试剂
二甲苯（化学纯，广州化学试剂厂。批号：0503428）；伊文氏兰（Sigma公司产品）；乙酸（广东光华化学厂，批号：20121228）。
1.4 仪器
BS110S电子天平（Sartorius公司产品）；721分光光度计（上海第三分析仪器厂）
注射器、小鼠灌胃器、微量取液器、离心机。
2 实验方法
2.1 小鼠耳肿胀實验与腹腔毛细血管通透性实验[4]
将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组小鼠灌胃给药醋酸泼尼松，连续3天，每天1次，剂量分别为40mg/kg（体质量，下同）、20mg/kg、10mg/kg；在末次给药后0.5小时，各组小鼠尾静脉注射浓度为0.5g/100 mL的伊文氏兰生理盐水溶液10 mL/kg，然后立即腹腔注射0.6%醋酸0.2 mL/只，同时每鼠右耳两面涂100%二甲苯致炎剂0.02mL致炎，左耳作对照。致炎20min后，颈椎脱臼处死小鼠。
2.2 处理方法[1、3、6、5]
A、小鼠耳肿胀实验：沿小鼠耳廓基线剪下两耳，用直径9mm打孔器分别在各小鼠左右耳同一部位打下圆耳片，电子分析天平精密称定小鼠耳片重量。计算两耳重的差值。以左右耳片重量之差作为肿胀度，计算肿胀率[（右耳重-左耳重）/左耳重×100%]进行t检验，比较组间差异。
B、小鼠腹腔毛细血管通透性实验：剪开小鼠腹腔，用5 mL生理盐水冲洗腹腔数次， 微量取液器收集洗涤液，合并洗涤液加入生理盐水至100mL，离心（ 3000r/min） 5min， 在722 型分光光度计590nm处测定吸光度（OD值），进行t检验，比较组间差异。
2.3 统计学方法
采用SPSS统计软件对数据进行t检验。
3 实验结果
3.1 对小鼠耳肿胀度的影响
实验结果显示高、中、低剂量的醋酸泼尼松与空白对照组比较，能明显降低二甲苯所致小鼠耳肿胀的程度，差异具有统计学意义（P<0.01）；高、中剂量组降低二甲苯所致小鼠耳肿胀的程度更明显（见表1）。
表1 对小鼠耳肿胀度的影响（X±SD）
注：与空白对照组比较，**表示P<0.01。
3.2 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
实验结果显示高、中、低剂量的醋酸泼尼松与空白对照组比较，能降低吸光度OD值，差异具有统计学意义（P<0.01）；醋酸泼尼松能减少伊文氏兰的渗出量，减小毛细血管的通透性，有较强的抗炎作用（见表2）。
表2 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（X±SD）
注：与空白对照组比较，**表示P<0.01。
4 讨论
腹腔染料渗出法是研究药物抗炎作用的常用经典方法。低浓度的醋酸是一种强烈的致炎剂， 可分别导致小鼠耳廓组织的急性炎症水肿和腹腔组织毛细血管通透性的增加。炎症反应是机体最基本的抗损伤反应， 任何能够引起组织损伤的因素都可成为产生炎症的原因。炎症有3个不同时相：第一时相为急性或炎症早期， 主要表现是毛细血管扩张、通透性亢进、渗出和水肿；第二时相为炎症中期以血小板黏附及白细胞游走为特点， 与免疫反应紧密相关；第三时相为慢性炎症或炎症的后期则以纤维组织增生、肉芽肿形成为特点。
醋酸泼尼松属于肾上腺皮质激素类药，具有抗炎、抗过敏、抗风湿、免疫抑制作用，作用机理为：1.抗炎作用：本产品可减轻和防止组织对炎症的反应，从而减轻炎症的表现。激素抑制炎症细胞，包括巨噬细胞和白细胞在炎症部位的集聚，并抑制吞噬作用、溶酶体酶的释放以及炎症化学中介物的合成和释放。2.免疫抑制作用：包括防止或抑制细胞介导的免疫反应，延迟性的过敏反应，减少T淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性细胞的数目，降低免疫球蛋白与细胞表面受体的结合能力，并抑制白介素的合成与释放，从而降低T淋巴细胞向淋巴母细胞转化，并减轻原发免疫反应的扩展。可降低免疫复合物通过基底膜，并能减少补体成分及免疫球蛋白的浓度。本文针对其主治功能，设计了小鼠耳肿胀实验和小鼠腹腔毛细血管通透性试验探讨其抗炎功效。在所有实验结果中，给药组与空白组进行比较，均有统计学意义（P<0.01），说明实验方法和结果是可靠的。上述药效学研究结果表明，高、中、低剂量组的醋酸泼尼松与空白组进行比较，能明显降低二甲苯所致小鼠耳肿胀程度，能减少小鼠腹腔液伊文氏兰的渗出量，能拮抗醋酸引起的炎症， 降低炎症导致的腹膜通透性异常增高，减小毛细血管的通透性，提示本药物有较强的抗炎作用，为临床应用提供了可靠的科学的理论及实验依据。
参考文献
[1] 陈艳芬，江涛，唐春萍，等.高良姜总黄酮抗炎镇痛作用的实验研究[J].广东药学院学报，2009，25（2）：188-201.
[2] 孙慧静，引哚-2，3-二酮对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响[J].山东医药，2011，51（6）：30-31.
[3] 温柠如， 紫丹颗粒对小鼠毛细血管通透性及耳肿胀影响的实验研究[J].辽宁中医药大学学报，2011硕士毕业论文.
[4] 谢独，王晓春，李圆，张延伟，张昌政.肠炎安片抗炎作用的实验研究[J].甘肃中医，2010，23（7）：28-29.
[5] 滕久祥， 彭芝配等.九香止泻肠溶片对急性腹泻模型小鼠腹泻指数及腹腔毛细血管通透性影响[J].湖南中医药大学学报，2007，27（6）；34-36.
[6] 欧阳芳，薛敏菲，吴声振.咽一方对小鼠耳肿胀及腹腔毛细血管通透性的影响[J].中国实用医药，2014，9（19）：6-7.
【关键词】 醋酸泼尼松 抗炎 研究
醋酸泼尼松为肾上腺皮质激素类药，具有抗炎、抗过敏、抗风湿、免疫抑制等作用，临床上主要用于类风湿性关节炎、风湿热、哮喘持续状态、肾病综合征、溃疡性结肠炎等。通过动物实验，观察不同剂量醋酸泼尼松对于二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和毛细血管通透性的影响[1-3]，初步探讨不同剂量醋酸泼尼松量效上的差异，并希望能为推进醋酸泼尼松的临床推广提供理论支持。
1 材料与方法
1.1 动物与分组
KM小鼠40只，雄性，18～22g，由广州中医药大学实验动物中心提供，先适应性饲养1 周，再随机分为4组，Ⅰ组（醋酸泼尼松高剂量组）、Ⅱ组（醋酸泼尼松中剂量组）、Ⅲ组（醋酸泼尼松低剂量组）、Ⅳ组（空白对照组），每组各10只。
1.2 药物
醋酸泼尼松注射液（浙江仙琚制药股份有限公司，批号20120810；用生理盐水稀释成相应浓度）、生理盐水。
1.3 试剂
二甲苯（化学纯，广州化学试剂厂。批号：0503428）；伊文氏兰（Sigma公司产品）；乙酸（广东光华化学厂，批号：20121228）。
1.4 仪器
BS110S电子天平（Sartorius公司产品）；721分光光度计（上海第三分析仪器厂）
注射器、小鼠灌胃器、微量取液器、离心机。
2 实验方法
2.1 小鼠耳肿胀實验与腹腔毛细血管通透性实验[4]
将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组小鼠灌胃给药醋酸泼尼松，连续3天，每天1次，剂量分别为40mg/kg（体质量，下同）、20mg/kg、10mg/kg；在末次给药后0.5小时，各组小鼠尾静脉注射浓度为0.5g/100 mL的伊文氏兰生理盐水溶液10 mL/kg，然后立即腹腔注射0.6%醋酸0.2 mL/只，同时每鼠右耳两面涂100%二甲苯致炎剂0.02mL致炎，左耳作对照。致炎20min后，颈椎脱臼处死小鼠。
2.2 处理方法[1、3、6、5]
A、小鼠耳肿胀实验：沿小鼠耳廓基线剪下两耳，用直径9mm打孔器分别在各小鼠左右耳同一部位打下圆耳片，电子分析天平精密称定小鼠耳片重量。计算两耳重的差值。以左右耳片重量之差作为肿胀度，计算肿胀率[（右耳重-左耳重）/左耳重×100%]进行t检验，比较组间差异。
B、小鼠腹腔毛细血管通透性实验：剪开小鼠腹腔，用5 mL生理盐水冲洗腹腔数次， 微量取液器收集洗涤液，合并洗涤液加入生理盐水至100mL，离心（ 3000r/min） 5min， 在722 型分光光度计590nm处测定吸光度（OD值），进行t检验，比较组间差异。
2.3 统计学方法
采用SPSS统计软件对数据进行t检验。
3 实验结果
3.1 对小鼠耳肿胀度的影响
实验结果显示高、中、低剂量的醋酸泼尼松与空白对照组比较，能明显降低二甲苯所致小鼠耳肿胀的程度，差异具有统计学意义（P<0.01）；高、中剂量组降低二甲苯所致小鼠耳肿胀的程度更明显（见表1）。
表1 对小鼠耳肿胀度的影响（X±SD）
注：与空白对照组比较，**表示P<0.01。
3.2 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
实验结果显示高、中、低剂量的醋酸泼尼松与空白对照组比较，能降低吸光度OD值，差异具有统计学意义（P<0.01）；醋酸泼尼松能减少伊文氏兰的渗出量，减小毛细血管的通透性，有较强的抗炎作用（见表2）。
表2 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（X±SD）
注：与空白对照组比较，**表示P<0.01。
4 讨论
腹腔染料渗出法是研究药物抗炎作用的常用经典方法。低浓度的醋酸是一种强烈的致炎剂， 可分别导致小鼠耳廓组织的急性炎症水肿和腹腔组织毛细血管通透性的增加。炎症反应是机体最基本的抗损伤反应， 任何能够引起组织损伤的因素都可成为产生炎症的原因。炎症有3个不同时相：第一时相为急性或炎症早期， 主要表现是毛细血管扩张、通透性亢进、渗出和水肿；第二时相为炎症中期以血小板黏附及白细胞游走为特点， 与免疫反应紧密相关；第三时相为慢性炎症或炎症的后期则以纤维组织增生、肉芽肿形成为特点。
醋酸泼尼松属于肾上腺皮质激素类药，具有抗炎、抗过敏、抗风湿、免疫抑制作用，作用机理为：1.抗炎作用：本产品可减轻和防止组织对炎症的反应，从而减轻炎症的表现。激素抑制炎症细胞，包括巨噬细胞和白细胞在炎症部位的集聚，并抑制吞噬作用、溶酶体酶的释放以及炎症化学中介物的合成和释放。2.免疫抑制作用：包括防止或抑制细胞介导的免疫反应，延迟性的过敏反应，减少T淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性细胞的数目，降低免疫球蛋白与细胞表面受体的结合能力，并抑制白介素的合成与释放，从而降低T淋巴细胞向淋巴母细胞转化，并减轻原发免疫反应的扩展。可降低免疫复合物通过基底膜，并能减少补体成分及免疫球蛋白的浓度。本文针对其主治功能，设计了小鼠耳肿胀实验和小鼠腹腔毛细血管通透性试验探讨其抗炎功效。在所有实验结果中，给药组与空白组进行比较，均有统计学意义（P<0.01），说明实验方法和结果是可靠的。上述药效学研究结果表明，高、中、低剂量组的醋酸泼尼松与空白组进行比较，能明显降低二甲苯所致小鼠耳肿胀程度，能减少小鼠腹腔液伊文氏兰的渗出量，能拮抗醋酸引起的炎症， 降低炎症导致的腹膜通透性异常增高，减小毛细血管的通透性，提示本药物有较强的抗炎作用，为临床应用提供了可靠的科学的理论及实验依据。
参考文献
[1] 陈艳芬，江涛，唐春萍，等.高良姜总黄酮抗炎镇痛作用的实验研究[J].广东药学院学报，2009，25（2）：188-201.
[2] 孙慧静，引哚-2，3-二酮对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响[J].山东医药，2011，51（6）：30-31.
[3] 温柠如， 紫丹颗粒对小鼠毛细血管通透性及耳肿胀影响的实验研究[J].辽宁中医药大学学报，2011硕士毕业论文.
[4] 谢独，王晓春，李圆，张延伟，张昌政.肠炎安片抗炎作用的实验研究[J].甘肃中医，2010，23（7）：28-29.
[5] 滕久祥， 彭芝配等.九香止泻肠溶片对急性腹泻模型小鼠腹泻指数及腹腔毛细血管通透性影响[J].湖南中医药大学学报，2007，27（6）；34-36.
[6] 欧阳芳，薛敏菲，吴声振.咽一方对小鼠耳肿胀及腹腔毛细血管通透性的影响[J].中国实用医药，2014，9（19）：6-7.