【摘 要】
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目的 研究永生化人肝窦内皮细胞(LSEC)株的形态和功能特性,评价其作为体外研 究肝缺血再灌注损伤的细胞材料的可行性.方法 首先应用细胞免疫荧光染色、荧光显微镜以及流 式细胞术检测LSEC细胞株的纯度,透射和扫描电子显微镜技术观察细胞内的W-P小体和吞噬磁珠 的能力以及细胞表面窗孔结构.然后利用MTT法检测细胞的生长曲线,ELISA 法比较TNF-α刺激后人LSEC细胞株和原代LSEC黏附分子、纤
【机 构】
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100029,北京,中日友好医院手术麻醉科,中日友好医院临床医学研究所,中日友好医院临床医学研究所,100029,北京,中日友好医院手术麻醉科
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目的 研究永生化人肝窦内皮细胞(LSEC)株的形态和功能特性,评价其作为体外研 究肝缺血再灌注损伤的细胞材料的可行性.方法 首先应用细胞免疫荧光染色、荧光显微镜以及流 式细胞术检测LSEC细胞株的纯度,透射和扫描电子显微镜技术观察细胞内的W-P小体和吞噬磁珠 的能力以及细胞表面窗孔结构.然后利用MTT法检测细胞的生长曲线,ELISA 法比较TNF-α刺激后人LSEC细胞株和原代LSEC黏附分子、纤溶活性分子和细胞因子的表达.最后采用TUNEL法比较两者对冷缺血再灌注损伤诱导凋亡的敏感性.结果 所建立的人LSEC 细胞株纯度达到95%以上.在形态上,人LSEC细胞株胞质内含有W-P小体,表面具有LSEC特异的窗孔结构.在功能上,人LSEC细胞株具有吞噬磁珠的能力和较强的增殖能力.在TNF-α刺激下,人LSEC细胞株和人原代 LSEC均剂量依赖性表达ELAM-1和ICAM-1,释放PAI-1、t-PA和u-PA;但人LSEC细胞株不产生IL-6 和IL-8.经冷缺血再灌注后,人LSEC细胞株的凋亡细胞百分率达到(38.4±6.7)%,明显高于人原代LBEC的(28.6±4.5)%和人脐静脉内皮细胞的(7.8±1.2)%.结论 已建立的人LSEC细胞株具有人原代LSEC的形态和主要功能特性,保留了对冷缺血再灌注损伤诱导凋亡的高度敏感性,因此可以作为体外研究肝脏缺血再灌注损伤机制的细胞材料。
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