【摘 要】
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目的观察全氟辛酸（PFOA）对体外培养的人恶性胚胎横纹肌瘤（RD）细胞的增殖、迁移及侵袭的影响，并初步探讨其作用机制。方法应用不同浓度PFOA作用体外培养的RD细胞一定时间后，使用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK8）检测细胞活力并确定PFOA作用浓度；使用该浓度PFOA处理RD细胞，通过划痕实验和细胞体外侵袭（transwell）实验评估细胞的侵袭和迁移能力，流式细胞术检测细胞周期的分布，实时荧光
【机 构】
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温州医科大学检验医学院 生命科学学院，温州 325035；解放军总医院第一医学中心医学检验中心，北京 100853,解放军总医院第一医学中心医学检验中心，北京 100853,解放军总医院第一医学中心医
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目的观察全氟辛酸（PFOA）对体外培养的人恶性胚胎横纹肌瘤（RD）细胞的增殖、迁移及侵袭的影响，并初步探讨其作用机制。
方法应用不同浓度PFOA作用体外培养的RD细胞一定时间后，使用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK8）检测细胞活力并确定PFOA作用浓度；使用该浓度PFOA处理RD细胞，通过划痕实验和细胞体外侵袭（transwell）实验评估细胞的侵袭和迁移能力，流式细胞术检测细胞周期的分布，实时荧光定量PCR（qPCR）检测相关基因mRNA表达差异，蛋白质免疫印迹法（WB）检测相关蛋白水平表达差异。
结果CCK8结果显示不同浓度PFOA作用RD细胞72 h后，呈现出低浓度PFOA（1、10、50、100 μmol/L）促进、高浓度PFOA（250、500 μmol/L）抑制细胞增殖的趋势，与对照组相比，50 μmol/L PFOA组对RD细胞的增殖呈现促进作用（P<0.001）。流式细胞术结果显示PFOA（50 μmol/L）作用RD细胞72 h后，G0/G1期细胞差异无统计学意义，S期细胞减少，G2/M期细胞增加。S期及G2/M期相对比例在PFOA组及对照组之间差异均有统计学意义（均P<0.01）。qPCR结果显示在mRNA水平，对照组与PFOA（50 μmol/L）处理组的细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶2（CDK2）相对表达量分别为0.97±0.07、2.64±0.11，差异有统计学意义（t=12.60，P<0.001）；细胞周期蛋白E2（cyclin E2）相对表达量分别为1.33±0.17、3.35±0.22，差异有统计学意义（t=7.42，P<0.001）；WB结果显示，对照组与PFOA（50 μmol/L）处理组的CDK2相对表达量分别为0.35±0.01、0.84±0.03，差异有统计学意义（t=14.60，P<0.001）；cyclin E2相对表达量分别为0.67±0.04、0.86±0.01，差异有统计学意义（t=4.88，P<0.01）。p21、p53在mRNA及蛋白表达差异均无统计学意义（均P>0.05）。划痕实验结果显示，PFOA（50 μmol/L）组的划痕愈合速度明显加快，其相对迁移面积大于对照组（P<0.001）；transwell侵袭试验显示与对照组相比，PFOA（50 μmol/L）组细胞穿过小孔数增多（t=54.40，P<0.001），侵袭能力明显增强。qPCR结果显示在mRNA水平，对照组与PFOA（50 μmol/L）处理组的波形蛋白（vimentin）相对表达量分别为0.71±0.03、2.53±0.16，差异有统计学意义（t=11.00，P<0.001）；基质金属蛋白酶2（MMP2）相对表达量分别为1.09±0.04、10.73±1.20，差异有统计学意义（t=8.04，P<0.001）。WB结果显示，对照组与PFOA（50 μmol/L）处理组的vimentin相对表达量分别0.55±0.06、0.81±0.01，差异有统计学意义（t=4.50，P<0.05）；MMP2相对表达量分别为0.64±0.04、1.03±0.13，差异有统计学意义（t=2.94，P<0.05）。
结论低剂量PFOA（50 μmol/L）暴露可通过上调细胞周期相关蛋白及MMP2、vimentin促进横纹肌肉瘤细胞的增殖、侵袭转移。
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