肠道病毒71型的全长cDNA感染性克隆的构建与鉴定

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目的构建一株肠道病毒71型的全长cDNA克降并验证感染性。方法 用长片段高保真RT-PCR方法扩增肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的cDNA,装入pBR322载体。将该克隆线性化,体外转录后转染RD细胞后,通过观察CPE及RT—PCR验证其感染性。随后利用空斑法测定拯救病毒的一步生长曲线。结果成功构建厂肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的全长cDNA克隆;体外转录及转染RD细胞60h后可观察到明显的CPE现象;RT-PCR在转染RD细胞中枪测到病毒的存在;成功利用空斑法测定了拯救病毒的一
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