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摘要：
目的：建立脑络通胶囊中黄芪甲苷含量测定的方法。方法：色谱柱为Agilent Eclipse XDB C18（250mm×4.6mm，5μm）；以乙腈-水（32：68）为流动相；流速1.0mL/min；柱温30℃。ELSD检测条件：（漂移管温度：40℃，增益：4）。结果：黄芪甲苷进样量在1.23～6.15μg范围内呈良好的线性关系（r=0.9994），加样回收率为99.67%，RSD为0.33%（n=6）；结论：本方法简单、准确、重复性好，可用于脑络通胶囊中黄芪甲苷的含量测定。
关键词：黄芪甲苷；脑络通胶囊；高效液相-蒸发光散射检测法
【中图分类号】
R453 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）08-0062-01
脑络通胶囊由丹参浸膏、盐酸托哌酮、川芎浸膏、甲基橙皮苷、黄芪浸膏、维生素B6组成，具有补气活血，通经活络的功效。本方中的黄芪是补气虚的主药，而黄芪甲苷是黄芪的主要成分。原标准（《中药成方制剂第19册》）未作黄芪甲苷的含量测定，笔者建立了测定脑络通胶囊中黄芪甲苷含量的高效液相-蒸发光散射检测法[1-3]。以为进一步完善该制剂的质量控制标准提供依据。
1 仪器和试药
LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津公司）；岛津ELSD-LT II蒸发光散射检测器；Sartorius-ME235S电子天平；黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110781-200613，供含量测定用，含量100.0%）；脑络通胶囊（广西欢宝药业有限公司，批号分别为20130701，20130703，20130801）。乙腈为色谱纯（经0.45μm滤膜过滤），其余试剂均为分析纯。
2 方法和结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验：
色谱柱：Agilent Eclipse XDB C18；流动相：乙腈-水（32：68）；流速1.0mL/min；柱温30℃。ELSD检测条件：（漂移管温度：40℃，增益：4）。进样量：10μL。
2.2 溶液制备：
对照品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷对照品20.46mg，置100mL量瓶中，加甲醇适量，振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备：取本品10粒的内容物，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇100ml，冷浸过夜，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，柱高12cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。阴性对照品溶液的制备：按脑络通胶囊剂制备工艺，制备缺黄芪的阴性样品，照供品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。
2.3 方法学考察：
专属性试验 分别精密吸取2.2项下3种溶液各10μL，按拟定的色谱条件进样。记录色谱图，在此条件下，理论塔板数以黄芪甲苷峰计算大于4000。见图1。可见，在对照品溶液色谱主峰处，供试品溶液色谱相同保留时间的色谱峰，阴性对照品溶液无此色谱峰，说明处方中其他成分对测定无干扰。
线性关系考察 密称取黄芪甲苷对照品24.60mg，置20mL容量瓶中，得质量浓度为1.23mg/ml作为母液，分别精密吸取母液1、2、3、4、5ml，分别定容于10ml的容量瓶中，得质量浓度分别为0.123、0.246、0.369、0.492、0.615mg/ml的对照品溶液，取上述溶液10μl，注入液相色谱仪，以进样量的常用对数值（x）为横坐标，以峰面积的常用对数值（y）为纵坐标，线性回归得回归方程为：y=1.1092x+2.7535，r=0.9997，表明进样量在1.23～6.15μg范围内线性关系良好。
2.4 样品测定：
取样品3批，按拟定色谱条件操作，测定含量，结果批号为20130701，20130703，20130801的3批样品中黄芪甲苷的含量分别为0.236，0.241，0.238mg/g。
3 讨论
供试品溶液的制备时，比较了超声提取法，加热回流法，索氏提取法，结果显示索氏提取法效果最理想。对流动相的组成比例进行了反复试验，结果显示以乙腈-水（32：68）为流动相，分离效果较好。蒸发光散射（ELSD）检测器适用于检测黄芪甲苷类等无紫外吸收或微弱紫外末端吸收的物质，具有较高的检测灵敏度，且稳定性和重现性良好。实验结果表明，本方法简单、准确、重复性好，可用于脑络通胶囊中黄芪甲苷的含量测定。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].中国医药科技出版，2010.283.
[2]陈锡琨，HPLC-ELSD法测定玉屏风胶囊中黄芪甲苷的含量，[J]中国医药杂指南，2013，8（11）：8-9.
[3]杨晓腾，李井涛，郭美琳，HPLC-ELSD法测定止痛化瘀胶囊中黄芪甲苷的含量，[J]中国药事，2012，26（7）：751-752.
目的：建立脑络通胶囊中黄芪甲苷含量测定的方法。方法：色谱柱为Agilent Eclipse XDB C18（250mm×4.6mm，5μm）；以乙腈-水（32：68）为流动相；流速1.0mL/min；柱温30℃。ELSD检测条件：（漂移管温度：40℃，增益：4）。结果：黄芪甲苷进样量在1.23～6.15μg范围内呈良好的线性关系（r=0.9994），加样回收率为99.67%，RSD为0.33%（n=6）；结论：本方法简单、准确、重复性好，可用于脑络通胶囊中黄芪甲苷的含量测定。
关键词：黄芪甲苷；脑络通胶囊；高效液相-蒸发光散射检测法
【中图分类号】
R453 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）08-0062-01
脑络通胶囊由丹参浸膏、盐酸托哌酮、川芎浸膏、甲基橙皮苷、黄芪浸膏、维生素B6组成，具有补气活血，通经活络的功效。本方中的黄芪是补气虚的主药，而黄芪甲苷是黄芪的主要成分。原标准（《中药成方制剂第19册》）未作黄芪甲苷的含量测定，笔者建立了测定脑络通胶囊中黄芪甲苷含量的高效液相-蒸发光散射检测法[1-3]。以为进一步完善该制剂的质量控制标准提供依据。
1 仪器和试药
LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津公司）；岛津ELSD-LT II蒸发光散射检测器；Sartorius-ME235S电子天平；黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110781-200613，供含量测定用，含量100.0%）；脑络通胶囊（广西欢宝药业有限公司，批号分别为20130701，20130703，20130801）。乙腈为色谱纯（经0.45μm滤膜过滤），其余试剂均为分析纯。
2 方法和结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验：
色谱柱：Agilent Eclipse XDB C18；流动相：乙腈-水（32：68）；流速1.0mL/min；柱温30℃。ELSD检测条件：（漂移管温度：40℃，增益：4）。进样量：10μL。
2.2 溶液制备：
对照品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷对照品20.46mg，置100mL量瓶中，加甲醇适量，振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备：取本品10粒的内容物，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇100ml，冷浸过夜，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，柱高12cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。阴性对照品溶液的制备：按脑络通胶囊剂制备工艺，制备缺黄芪的阴性样品，照供品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。
2.3 方法学考察：
专属性试验 分别精密吸取2.2项下3种溶液各10μL，按拟定的色谱条件进样。记录色谱图，在此条件下，理论塔板数以黄芪甲苷峰计算大于4000。见图1。可见，在对照品溶液色谱主峰处，供试品溶液色谱相同保留时间的色谱峰，阴性对照品溶液无此色谱峰，说明处方中其他成分对测定无干扰。
线性关系考察 密称取黄芪甲苷对照品24.60mg，置20mL容量瓶中，得质量浓度为1.23mg/ml作为母液，分别精密吸取母液1、2、3、4、5ml，分别定容于10ml的容量瓶中，得质量浓度分别为0.123、0.246、0.369、0.492、0.615mg/ml的对照品溶液，取上述溶液10μl，注入液相色谱仪，以进样量的常用对数值（x）为横坐标，以峰面积的常用对数值（y）为纵坐标，线性回归得回归方程为：y=1.1092x+2.7535，r=0.9997，表明进样量在1.23～6.15μg范围内线性关系良好。
2.4 样品测定：
取样品3批，按拟定色谱条件操作，测定含量，结果批号为20130701，20130703，20130801的3批样品中黄芪甲苷的含量分别为0.236，0.241，0.238mg/g。
3 讨论
供试品溶液的制备时，比较了超声提取法，加热回流法，索氏提取法，结果显示索氏提取法效果最理想。对流动相的组成比例进行了反复试验，结果显示以乙腈-水（32：68）为流动相，分离效果较好。蒸发光散射（ELSD）检测器适用于检测黄芪甲苷类等无紫外吸收或微弱紫外末端吸收的物质，具有较高的检测灵敏度，且稳定性和重现性良好。实验结果表明，本方法简单、准确、重复性好，可用于脑络通胶囊中黄芪甲苷的含量测定。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].中国医药科技出版，2010.283.
[2]陈锡琨，HPLC-ELSD法测定玉屏风胶囊中黄芪甲苷的含量，[J]中国医药杂指南，2013，8（11）：8-9.
[3]杨晓腾，李井涛，郭美琳，HPLC-ELSD法测定止痛化瘀胶囊中黄芪甲苷的含量，[J]中国药事，2012，26（7）：751-752.