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目的:建立测定尿液中巴比妥类药物水平[巴比妥(Barbital,bar)、苯巴比妥(Phenobarbital,phe)、异戊巴比妥(Amobarbital,amo)、司可巴比妥(Secobarbital,sec)]的高灵敏度的高效液相色谱-串联质谱联用(HPLC-MS/MS)分析方法。方法:尿液经乙醚+环己烷(1∶1)液液萃取、氮气吹干浓缩后,用高效液相色谱-串联质谱联用仪分析。结果:尿液中4种巴比妥类药物在0.01 mg/L～0.2 mg/L浓度范围内呈良好线性,线性相关系数r均大于0.99;加标回收率为91.3%～106.8%;bar的方法定量检出限为0.005 mg/L;amo、sec、phe的方法定量检出限为0.002 mg/L。结论:该方法检出限较低、线性范围宽、分析时间较短,可用于检测人体尿液中巴比妥类药物的含量。