【摘 要】
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H5亚型禽流感是重要的人兽共患病,建立现场快速分子学检测方法是其防控关键。本实验首次借助热裂解法抽提病毒RNA,建立H5亚型禽流感病毒(H5subtype avian influenza Virus,AI
【机 构】
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四川农业大学动物医学院; 深圳出入境检验检疫局; 深圳市检验检疫科学研究院; 深圳市外来有害生物质检测技术研发重点试验室;
【基金项目】
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科技部质检公益项目(201210018-4);深圳市基础研究重点项目(JC201105190875A)资助
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H5亚型禽流感是重要的人兽共患病,建立现场快速分子学检测方法是其防控关键。本实验首次借助热裂解法抽提病毒RNA,建立H5亚型禽流感病毒(H5subtype avian influenza Virus,AIV-H5)实时荧光反转录环介导等温扩增(Fluorescent quantitative real-time reversetranscription-LAMP,qRT-LAMP)检测法,并对该法进行特异性、敏感性、可重复性及可靠性分析;同时对比钙黄绿素(Calcein)、SYBR Green I、羟基萘酚蓝(Hydroxynaphthol blue,HNB)、SYTO 81四种荧光染色剂在颜色判定中的工作情况,筛选最佳染料。试验结果显示本实验所建AIV-H5qRT-LAMP法可有效鉴别AIV-H5,其敏感性较国家标准实时荧光RT-PCR检测法高100倍,最低检测限可达1个基因拷贝;该法与IBV、NDV等常见禽呼吸道传染病病原无交叉反应,特异性强;同时该法具有良好重复性。本实验筛选出最佳染色剂Calcein。小规模田间试验显示该法用于AIV-H5的普查监测结果可靠。可见本实验建立AIV-H5qRT-LAMP检测法可满足AIV-H5现场快速分子检测需求,具广阔应用空间。
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