【摘 要】
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目的探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)及胎牛血清对体外培养的人胚胎视网膜神经细胞生长、增殖、分化和凋亡等的影响及可能的机制. 方法采用胎牛血清培养人胚胎视网膜神经细胞,加入或不加入EGF、FGF.通过神经元特异稀醇化酶(neuron specific enolase, NSE)、
【机 构】
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200080,上海市第一人民医院中心实验室,
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目的探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)及胎牛血清对体外培养的人胚胎视网膜神经细胞生长、增殖、分化和凋亡等的影响及可能的机制. 方法采用胎牛血清培养人胚胎视网膜神经细胞,加入或不加入EGF、FGF.通过神经元特异稀醇化酶(neuron specific enolase, NSE)、视网膜神经节细胞特异的Thy1.1抗体、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫组织化学染色、倒置显微镜及扫描电镜观察鉴定细胞成分;细胞生长曲线及溴脱氧尿苷(bromodeoxyuridine, BrdU)掺入测定细胞增殖率;原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸切口末端标记(Tdt-mediated dUTP nick end labelling, TUNEL)检测细胞凋亡;c-fos、c-jun及bcl-2、bax免疫组织化学染色判断转录调控因子及细胞凋亡调控因子表达水平,计数阳性细胞并进一步作统计分析. 结果经过EGF、FGF培养的人胚胎视网膜细胞总数增加,细胞倍增时间缩短,BrdU掺入率增加,凋亡细胞数减少,其中NSE、Thy1.1阳性细胞数明显增加.同时,c-fos、c-jun及bcl-2阳性细胞数也增加. 结论生长因子EGF、FGF可通过上调转录因子c-fos、c-jun及细胞凋亡抑制因子bcl-2表达促进体外培养的人胚胎视网膜细胞存活与增殖.
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